米曲霉因其在發(fā)酵過程中可分泌大量水解酶類,被作為傳統(tǒng)釀造食品的常用菌株。其分泌的水解酶主要包括蛋白水解酶和糖類水解酶。這兩類酶分解底物產(chǎn)生的氨基酸、多肽、寡糖、單糖等小分子物質(zhì),是傳統(tǒng)發(fā)酵食品風(fēng)味的主要來源。具有優(yōu)良產(chǎn)酶性能的米曲霉菌株對(duì)發(fā)酵工業(yè)有重大意義。近年來,米曲霉由于其強(qiáng)大的表達(dá)外源蛋白的能力越來越被重視。與畢赤酵母和大腸桿菌相比,米曲霉具備更強(qiáng)大的翻譯后修飾的功能;與植物及昆蟲相比,米曲霉對(duì)生長環(huán)境的要求更低,生長周期更短,是表達(dá)外源蛋白的理想宿主。本文對(duì)本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的米曲霉菌株進(jìn)行了對(duì)比研究,主要研究內(nèi)容如下:1.不同米曲霉菌株培養(yǎng)特性對(duì)比分析通過平板培養(yǎng)對(duì)八株米曲霉菌株進(jìn)行了產(chǎn)孢量的比較,接種量為10⁵個(gè)孢子時(shí),每株菌每個(gè)平板都能收集到10⁷數(shù)量級(jí)的孢子。其中,H4的產(chǎn)孢量最高,平均可達(dá)7.9×10⁷個(gè)孢每平板,是產(chǎn)孢量最少的B菌株均值的4.72倍。在液態(tài)發(fā)酵條件下(接種量10⁵個(gè)/mL,28℃180 rpm搖床培養(yǎng)),幾株米曲霉的發(fā)酵液pH值都呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì);發(fā)酵初期菌絲體濕...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語
第一章 引言
    1.1 米曲霉
    1.2 米曲霉基因組研究進(jìn)展
    1.3 米曲霉外源表達(dá)系統(tǒng)
        1.3.1 轉(zhuǎn)化方法
        1.3.2 篩選方法
        1.3.3 提高蛋白表達(dá)的策略
        1.3.4 米曲霉外源表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用
    1.4 脂肪酶
        1.4.1 脂肪酶的定義及來源
        1.4.2 微生物脂肪酶的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)理
        1.4.3 脂肪酶的應(yīng)用
    1.5 主要研究內(nèi)容和意義
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 本研究的意義
第二章 不同米曲霉菌株培養(yǎng)特性的比較
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 菌株和質(zhì)粒
        2.2.2 主要儀器與設(shè)備
        2.2.3 生化試劑
        2.2.4 溶液與培養(yǎng)基
    2.3 方法
        2.3.1 孢子的收集
        2.3.2 米曲霉產(chǎn)孢量分析
        2.3.3 幾株米曲霉抗生素敏感度的驗(yàn)證
        2.3.4 液態(tài)發(fā)酵及產(chǎn)酶分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 米曲霉產(chǎn)孢量分析
        2.4.2 不同米曲霉菌株對(duì)吡啶硫胺素敏感度的驗(yàn)證
        2.4.3 不同米曲霉菌株對(duì)潮霉素敏感度的驗(yàn)證
        2.4.4 不同米曲霉菌株對(duì)苯菌靈敏感度的驗(yàn)證
        2.4.5 液態(tài)發(fā)酵過程中發(fā)酵液pH
        2.4.6 液態(tài)發(fā)酵過程中菌絲體濕重變化分析
        2.4.7 液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)α-淀粉酶活力分析
        2.4.8 液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)糖化酶活力分析
        2.4.9 液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)蛋白酶活力分析
    2.5 討論
        2.5.1 米曲霉對(duì)幾種抗生素敏感度驗(yàn)證
        2.5.2 淀粉酶活力定義
        2.5.3 液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶分析
    2.6 小結(jié)
第三章 脂肪酶表達(dá)載體的構(gòu)建及在米曲霉中的表達(dá)
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 菌株和質(zhì)粒
        3.2.2 主要儀器與設(shè)備
        3.2.3 生化試劑
        3.2.4 溶液與培養(yǎng)基
    3.3 方法
        3.3.1 pUC18-hygB-LIP表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 pUC18-hygB-LIP表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化與鑒定
        3.3.3 原生質(zhì)體制備
        3.3.4 原生質(zhì)體再生與轉(zhuǎn)化
        3.3.5 轉(zhuǎn)化子篩選
        3.3.6 脂肪酶的表達(dá)
        3.3.7 滴定法測定脂肪酶活力
        3.3.8 對(duì)硝基苯酚法(p-NP)測定脂肪酶活力
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 hyg B基因的獲取
        3.4.2 目的片段及載體酶切
        3.4.3 pUC18-hygB-LIP重組表達(dá)載體陽性克隆子的鑒定
        3.4.4 原生質(zhì)體制備
        3.4.5 轉(zhuǎn)化子篩選
        3.4.6 脂肪酶活力測定
    3.5 討論
        3.5.1 重組蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.2 原生質(zhì)體制備條件分析
        3.5.3 脂肪酶的異源表達(dá)
    3.6 小結(jié)
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號(hào)：3866727