花色素苷(Anthocyanin)具有抗癌,抗炎等功能,大量應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等各方面,同時花色素苷在植物花卉花色研究中有重要意義,因此花色素苷生物合成調(diào)控的研究已成為近年來的熱點�；ㄉ剀盏纳锖铣沙耸芷渫緩缴详P(guān)鍵酶基因的影響,還受到轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。MYB轉(zhuǎn)錄因子(MYB transcription factor,MYB)是植物中最大一類轉(zhuǎn)錄因子家族之一,前人的研究表明MYB不僅參與初生代謝的調(diào)控,也會參與次生代謝的調(diào)控。其中R2R3類型的MYB(R2R3-MYB)是植物中調(diào)控花色素苷生物合成的重要轉(zhuǎn)錄因子。許多茄科植物都是具有經(jīng)濟價值的作物,如糧食作物馬鈴薯(Solanum tuberosum)、蔬菜作物番茄(Solanum lycopersicum)、藥用植物顛茄(Atropa belladonna)等。顛茄隸屬于茄科顛茄屬,顛茄成熟果實的果皮、果肉富含花色素苷而均呈現(xiàn)為黑紫色。而其他茄科作物如番茄、辣椒(Capsicum annuum)和茄子(Solanum melongena)等的果肉一般不含或含有極少量花色素苷,表明在藥用植物顛茄中可能會存在特定的R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子參...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 花色素苷概況
    1.2 花色素苷生物合成途徑
    1.3 花色素苷生物合成途徑中的關(guān)鍵酶基因
        1.3.1 查爾酮合酶
        1.3.2 查爾酮異構(gòu)酶
        1.3.3 黃烷酮3-羥化酶
        1.3.4 類黃酮3'羥化酶和類黃酮3',5'羥化酶
        1.3.5 二氫黃酮醇4-還原酶
        1.3.6 花色素合成酶
        1.3.7 類黃酮3-O-葡糖基轉(zhuǎn)移酶
    1.4 調(diào)控花色素苷生物合成的MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與分類
        1.4.2 正調(diào)控花色素苷生物合成的MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.4.3 負調(diào)控花色素苷生物合成的MYB轉(zhuǎn)錄因子
    1.5 茄科植物中調(diào)控花色素苷生物合成的MYB轉(zhuǎn)錄因子
第2章 緒論
    2.1 研究目的和意義
    2.2 研究內(nèi)容
    2.3 技術(shù)路線
第3章 實驗材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌種和質(zhì)粒
    3.2 實驗試劑
        3.2.1 酶、試劑盒、引物
        3.2.2 激素和抗生素
        3.2.3 植物培養(yǎng)基和試劑培養(yǎng)基
        3.2.4 其他試劑
    3.3 常用激素、抗生素及培養(yǎng)基的配制
    3.4 常用培養(yǎng)基
    3.5 儀器設(shè)備
    3.6 常規(guī)實驗方法與操作步驟
        3.6.1 顛茄不同組織RNA的提取
        3.6.2 RNA反轉(zhuǎn)成c DNA
        3.6.3 瓊脂糖凝膠電泳
        3.6.4 DNA片段的回收
        3.6.5 連接反應(yīng)
        3.6.6 CaCl₂ 法制備大腸桿菌JM109 感受態(tài)
        3.6.7 化轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)入大腸桿菌JM109 感受態(tài)
        3.6.8 單克隆菌落的陽性檢測
        3.6.9 陽性單菌落的擴大培養(yǎng)和質(zhì)粒提取
        3.6.10 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備
        3.6.11 凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.6.12 熒光定量PCR
    3.7 AbMYB1 的克隆與分析
        3.7.1 顛茄果實總RNA提取及合成第一鏈cDNA
        3.7.2 AbMYB1 基因的克隆
        3.7.3 進化樹分析
        3.7.4 氨基酸序列比對
        3.7.5 熱圖分析
    3.8 基因的組織特異性分析
    3.9 顛茄果實發(fā)育過程中花色素苷生物合成相關(guān)基因的表達變化分析
    3.10 AbMYB1 過表達載體的構(gòu)建及工程菌的獲得
    3.11 AbMYB1 干擾載體的構(gòu)建
    3.12 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.12.1 顛茄種子的萌發(fā)
        3.12.2 農(nóng)桿菌的活化
        3.12.3 轉(zhuǎn)基因顛茄植株的獲得
        3.12.4 TPS法提取轉(zhuǎn)基因材料的DNA
        3.12.5 PCR法鑒定轉(zhuǎn)基因顛茄的陽性
    3.13 轉(zhuǎn)基因顛茄花色素苷含量積累情況觀察
    3.14 總花色素苷含量測定
    3.15 轉(zhuǎn)基因顛茄中花色素苷生物合成相關(guān)基因表達量分析
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 顛茄花色素苷生物合成途徑基因的篩選
    4.2 顛茄花色素苷生物合成途徑基因與AbMYB1 聚類分析
    4.3 AbMYB1的c DNA克隆與分析
    4.4 AbMYB1 的生物信息學分析
        4.4.1 AbMYB1 進化分析
        4.4.2 AbMYB1 氨基酸序列比對
    4.5 AbMYB1 基因表達模式分析
    4.6 顛茄果實不同發(fā)育時期花色素苷生物合成相關(guān)基因的表達變化
    4.7 AbMYB1 轉(zhuǎn)基因顛茄的獲得
        4.7.1 顛茄的遺傳轉(zhuǎn)化
        4.7.2 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
    4.8 AbMYB1 轉(zhuǎn)基因顛茄植株中花色素苷含量分析
        4.8.1 轉(zhuǎn)基因顛茄葉片的花色素苷積累情況分析
        4.8.2 轉(zhuǎn)基因顛茄花的花色素苷積累情況分析
        4.8.3 轉(zhuǎn)基因顛茄果實的花色素苷積累情況分析
    4.9 轉(zhuǎn)AbMYB1 對顛茄花色素苷生物合成相關(guān)基因表達的影響
        4.9.1 轉(zhuǎn)基因顛茄葉片中花色素苷生物合成相關(guān)基因的變化
        4.9.2 轉(zhuǎn)基因顛茄花中花色素苷生物合成相關(guān)基因的變化
        4.9.3 轉(zhuǎn)基因顛茄坐果13 天的果實花色素苷生物合成相關(guān)基因的變化
        4.9.4 轉(zhuǎn)基因顛茄成熟果中花色素苷生物合成相關(guān)基因的變化
    4.10 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
附錄
    縮略詞表
    載體圖譜
致謝
碩士期間發(fā)表論文



本文編號：3861627