構(gòu)建菠蘿(Ananas comosus(Linn.) Merr.)質(zhì)膜水通道蛋白基因(AcPIP1∶2)原核表達(dá)載體和體外轉(zhuǎn)錄載體,為制備AcPIP1∶2抗體和含有Poly(A)+的AcPIP1∶2轉(zhuǎn)錄子奠定基礎(chǔ).以菠蘿果實(shí)為試驗(yàn)材料,提取總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA.以cDNA為模板,根據(jù)GenBank中公布的AcPIP1∶2全長(zhǎng)cDNA序列(登錄號(hào):XM₀20229679.1)設(shè)計(jì)合成特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得AcPIP1∶2開(kāi)放閱讀框(ORF)序列.序列分析表明,獲得的AcPIP1∶2序列與GenBank中公布的序列一致,序列長(zhǎng)度為867 bp.該序列經(jīng)Hind III和Xho I雙酶切后亞克隆至原核表達(dá)載體pET32a(+),酶切、測(cè)序表明,成功構(gòu)建了重組載體pET32a(+)-AcPIP1∶2.將pET32a(+)-AcPIP1∶2轉(zhuǎn)到大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)中表達(dá),結(jié)果表明,異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)產(chǎn)生分子量為50 ku的融合蛋白.該序列經(jīng)Hind III和Xba I雙酶切后亞克隆至載體pSP64 Poly(A)中,酶切、測(cè)序表明...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 菠蘿果實(shí)總RNA質(zhì)量的檢測(cè)
    2.2 AcPIP1-2 ORF序列的擴(kuò)增
    2.3 AcPIP1∶2 ORF的測(cè)序及序列分析
    2.4 原核表達(dá)載體pET32a(+)-AcPIP1∶2的構(gòu)建
    2.5 原核表達(dá)及鑒定
    2.6 AcPIP1∶2的非洲爪蟾卵母細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建
3 結(jié)論



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