目的探討下調(diào)microRNA-10b(miR-10b)對小鼠脂肪干細胞(ADSCs)成骨分化的影響。方法分離培養(yǎng)小鼠ADSCs,對其進行細胞形態(tài)學(xué)及流式細胞術(shù)鑒定;應(yīng)用脂質(zhì)體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染小鼠ADSCs,將轉(zhuǎn)染miR-10b inhibitor、si-CEBPα及miR-10b inhibitor+si-CEBPα的ADSCs依次設(shè)為miR-10b inhibitor組、si-CEBPα組及miR-10b inhibitor+si-CEBPα組;同時將上述對應(yīng)的陰性對照序列轉(zhuǎn)染入ADSCs中,分別記為miR-NC組、si-NC組及miR-NC+si-NC組,正常對照組(control組)為無任何特殊處理的ADSCs;采用RT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染后ADSCs中miR-10b的表達;生物信息學(xué)預(yù)測miR-10b與CEBPα的靶向關(guān)系,并采用雙熒光素酶基因報告實驗、實時熒光定量PCR及Western blot驗證兩者的靶向關(guān)系;利用茜素紅染色及堿性磷酸酶(ALP)活性檢測實驗明確miR-10b對小鼠ADSCs成骨分化的影響及CEBPα在其中的作用。結(jié)果與control組和miR-NC組相比,m...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料及方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠ADSCs的分離培養(yǎng)
        1.2.2 小鼠ADSCs的鑒定
        1.2.3 細胞轉(zhuǎn)染及分組
        1.2.4 實時熒光定量PCR(RT-PCR)
        1.2.5 雙熒光素酶基因報告實驗
        1.2.6 Western blot檢測
        1.2.7 小鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化
        1.2.8 堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 小鼠ADSCs的形態(tài)及鑒定
    2.2 轉(zhuǎn)染miR-10b inhibitor后ADSCs中miR-10b mRNA的表達
    2.3 miR-10b與CEBPα在ADSCs中的靶向關(guān)系及驗證
    2.4 miR-10b對ADSCs成骨分化的影響
    2.5 CEBPα在miR-10b對ADSCs成骨分化影響中的作用
3討論



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