發(fā)布時間：2023-02-20 18:43

　　目前食源性致病菌檢測領(lǐng)域存在的主要問題是不能實現(xiàn)致病菌的快速檢測和活菌與死菌的區(qū)分。因此,對食源性致病細菌快速,靈敏,低成本的檢測方法的研究對保障食品安全和人類健康具有重要意義。表面增強拉曼散射光譜(Surface-enhanced Raman scattering,SERS)技術(shù)能夠獲得完整的微生物指紋圖譜,基于SERS的致病菌標記檢測方法具有高靈敏度、高選擇性、反應時間快、樣品制備簡便等優(yōu)點。本研究構(gòu)建了以濾紙和玻片為固相基質(zhì)的兩種SERS基底,分別對五種食源性致病菌進行了鑒定以及基于適配體的金黃色葡萄球菌的特異性定量檢測。主要研究工作包括:首先,構(gòu)建了一種基于Au@Ag NPs/濾紙基底對五種食源性致病菌(鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、福氏志賀菌、單核細胞增生李斯特氏菌)檢測的方法,用于不同菌種的鑒定和區(qū)分。通過濾紙良好的吸水性將細菌固定在基底上,增加細菌同基底的接觸從而增強細菌SERS信號。結(jié)果顯示五種細菌SERS光譜主要峰的位置接近,但振動峰的相對強度顯著不同,且不同菌種具有獨特的拉曼峰。將主成分分析(Principal components analysis...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 食源性致病菌
    1.2 食源性致病菌檢測方法概述
        1.2.1 傳統(tǒng)檢測方法
        1.2.2 代謝學檢測方法
        1.2.3 免疫學檢測方法
        1.2.4 分子生物學檢測方法
        1.2.5 生物傳感器檢測方法
    1.3 表面增強拉曼技術(shù)
        1.3.1 拉曼光譜概述
        1.3.2 表面增強拉曼技術(shù)
        1.3.3 表面增強拉曼光譜基底
        1.3.4 基于SERS的致病菌無標記檢測的應用
    1.4 適配體
        1.4.1 適配體概述
        1.4.2 基于適配體的致病菌SERS標記檢測的應用
    1.5 本課題的立題意義和研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 實驗材料與設(shè)備
        2.1.1 實驗材料與主要試劑
        2.1.2 主要設(shè)備
    2.2 基于Au@Ag NPs/濾紙基底對五種食源性致病菌檢測方法的研究
        2.2.1 檢測原理
        2.2.2 Au@Ag NPs的制備
        2.2.3 Au@Ag NPs/濾紙基底的制備
        2.2.4 Au@Ag NPs/濾紙基底的重現(xiàn)性、SERS增強性能及穩(wěn)定性研究
        2.2.5 細菌培養(yǎng)及SERS信號表征
        2.2.6 細菌SERS光譜處理
        2.2.7 細菌定量檢測
    2.3 基于適配體功能化Au@Ag NPs/玻片基底“夾心式”檢測金黃色葡萄球菌方法的研究
        2.3.1 檢測原理
        2.3.2 Au@Ag NPs/玻片基底的制備
        2.3.3 Au@Ag NPs/玻片基底的重現(xiàn)性及SERS增強性能研究
        2.3.4 適配體的前處理
        2.3.5 SH-適配體濃度和孵育時間的優(yōu)化
        2.3.6 金黃色葡萄球菌孵育時間的優(yōu)化
        2.3.7 ROX-適配體濃度的優(yōu)化
        2.3.8 Au@Ag NPs濃度的優(yōu)化
        2.3.9 金黃色葡萄球菌的檢測
        2.3.10 特異性實驗
        2.3.11 牛奶樣品中金黃色葡萄球菌的檢測及加標回收
    2.4 基于適配體免固定法Au@Ag NPs/玻片基底檢測金黃色葡萄球菌方法的研究
        2.4.1 檢測原理
        2.4.2 半胱胺鹽酸鹽與Au@Ag NPs/玻片基底孵育條件的優(yōu)化
        2.4.3 ROX-適配體的濃度及孵育時間優(yōu)化
        2.4.4 金黃色葡萄球菌孵育時間的優(yōu)化
        2.4.5 金黃色葡萄球菌的檢測
        2.4.6 特異性實驗
        2.4.7 牛奶樣品中金黃色葡萄球菌的檢測及加標回收
3 結(jié)果與討論
    3.1 基于Au@Ag NPs/濾紙基底對五種食源性致病菌檢測方法的研究
        3.1.1 Au@Ag NPs的紫外-可見吸收光譜及TEM分析
        3.1.2 Au@Ag NPs/濾紙基底的制備及SEM分析
        3.1.3 Au@Ag NPs/濾紙基底的重現(xiàn)性、SERS增強性能及穩(wěn)定性分析
        3.1.4 五種細菌SERS信號及主成分分析
        3.1.5 細菌定量分析
    3.2 基于適配體功能化Au@Ag NPs/玻片基底“夾心式”檢測金黃色葡萄球菌方法的研究
        3.2.1 Au@Ag NPs/玻片基底的制備及SEM分析
        3.2.2 Au@Ag NPs/玻片基底的重現(xiàn)性和SERS增強性能分析
        3.2.3 SH-適配體濃度和孵育時間的優(yōu)化分析
        3.2.4 金黃色葡萄球菌與適配體孵育時間的優(yōu)化分析
        3.2.5 ROX-適配體濃度的優(yōu)化分析
        3.2.6 Au@Ag NPs濃度的優(yōu)化分析
        3.2.7 金黃色葡萄球菌的線性范圍與檢測限分析
        3.2.8 特異性實驗分析
        3.2.9 牛奶樣品中金黃色葡萄球菌的檢測及加標回收分析
    3.3 基于適配體免固定法Au@Ag NPs/玻片基底檢測金黃色葡萄球菌方法的研究
        3.3.1 半胱胺鹽酸鹽與Au@Ag NPs/玻片基底孵育條件的優(yōu)化分析
        3.3.2 ROX-適配體濃度和孵育時間的優(yōu)化分析
        3.3.3 金黃色葡萄球菌孵育時間的優(yōu)化分析
        3.3.4 金黃色葡萄球菌的線性范圍與檢測限分析
        3.3.5 特異性實驗分析
        3.3.6 牛奶樣品中金黃色葡萄球菌的檢測及加標回收分析
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻
附錄 :作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文



本文編號：3747114