目的探討大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞橫向分化為肝細(xì)胞的過程中,八聚體轉(zhuǎn)錄因子4(Oct4)啟動子甲基化的調(diào)控機(jī)制。方法體外誘導(dǎo)大鼠骨髓源性肝干細(xì)胞(RBMLSC)向肝細(xì)胞橫向分化,于不同時間點(diǎn)(0 d、7 d、14 d)提取細(xì)胞的DNA及RNA。用熒光定量PCR法檢測白蛋白(ALB)和Oct4的mRNA表達(dá)水平,再用焦磷酸測序法檢測Oct4基因啟動子中4個CpG位點(diǎn)的甲基化變化。結(jié)果細(xì)胞分化過程中,與0 d組相比,7 d組和14 d組的ALB mRNA分別增加5.22倍(P <0.05)和14.7倍(P <0.001),而Oct4 mRNA分別下降0.23倍(P <0.01)和0.055倍(P <0.001);同時Oct4啟動子的CpG1、CpG2、CpG3甲基化頻率顯著上升,7 d組均明顯高于對照組和0 d組(P <0.01),14 d組又均明顯高于對照組、0 d組及7 d組(P <0.01),但CpG4甲基化無明顯變化。結(jié)論細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中,Oct4啟動子高甲基化,導(dǎo)致其mRNA表達(dá)減少,從而RBMLSC多能性消失。

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【文章目錄】：
1 試劑與方法
    1.1 試劑
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化
    1.3 熒光定量PCR
    1.4 啟動子甲基化
    1.5 焦磷酸測序
    1.6 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 肝細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)
    2.2 Oct4啟動子的甲基化
3 討論
4 結(jié)論



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