深海是一個黑暗、低溫、高壓和營養(yǎng)貧瘠的生態(tài)環(huán)境。深海微生物為了適應這樣極端的環(huán)境,微生物中分離得到的海洋微生物酶因此具有低溫催化高效、耐鹽、pH耐受范圍廣等特殊的酶學性質(zhì),因此具有很大的應用潛力。本研究從馬里亞納海溝深海微生物Alteromonas sp.ML117中克隆出產(chǎn)β-半乳糖苷酶的基因Bgal,通過構建表達載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進行外源表達。并對其進行純化和酶學性質(zhì)的研究,通過單因素和響應面實驗篩選并優(yōu)化了Bgal液體酶液的酶活保護劑最佳配方。通過對Bgal的氨基酸保守序列分析,重組酶Bgal屬于糖苷水解酶2家族。SDS-PAGE和凝膠過濾色譜實驗結果證明Bgal蛋白為四聚體。通過對表達條件的單因素實驗優(yōu)化,得到了最佳的表達條件是:在37^oC、OD₆₀₀為0.4時,加入0.2 mM IPTG于20^oC下繼續(xù)誘導表達20 h。采用Ni²⁺親和層析柱進行分離純化得到電泳純的Bgal,純化倍數(shù)為2.1。Bgal可以特異性地水解天然底物乳糖和鄰硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）。以ONPG作... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ONP標準曲線

Bgal同其他β-半乳糖苷酶的序列比對:Pseudoalteromonassp.22b(Ps-sp.-22b),PseudoalteromonashaloplanktisTAE79(Ps-sp.-hal),andE.coli(BGAL-ECOLI).紅色箭頭表示保守位點殘基Fig.2-2MultiplesequencealignmentofBgalwithotherβ-galactosidasesfromPseudoalteromonassp.22b(Ps-sp.-22b),PseudoalteromonashaloplanktisTAE79(Ps-sp.-hal),

pET24a-Bgal質(zhì)粒酶切圖

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3705910