目的:本實(shí)驗(yàn)研究嘗試建立一個(gè)穩(wěn)定、高效的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法;并嘗試對(duì)其培養(yǎng)后分泌的外泌體應(yīng)用最簡(jiǎn)易、最常用的超高速離心分離的方法進(jìn)行提取及并進(jìn)行特征化;為小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的有效獲取奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和方法。方法:通過(guò)應(yīng)用“全骨髓、差速貼壁并輔助以低氧環(huán)境”的優(yōu)化方法進(jìn)行小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）的培養(yǎng),并收集干細(xì)胞,進(jìn)行傳代,應(yīng)用流式細(xì)胞儀鑒定干細(xì)胞表面標(biāo)記物（CD117抗原、CD31抗原,整合素家族類抗原標(biāo)志分子CD29、黏附分子家族類抗原標(biāo)志分子CD44和Ly-6抗原家族成員Sca-1）。然后進(jìn)行成骨組織、成脂組織及成軟骨組織誘導(dǎo);茜素紅S鑒定成骨情況,油紅O染色鑒定成脂肪情況,阿利辛藍(lán)染色鑒定成軟骨情況;另外,在培養(yǎng)5代后收集BM-MSCs的上清液,應(yīng)用超高速離心分離的方法提取外泌體,電鏡檢測(cè)外泌體物理結(jié)構(gòu)、形態(tài);Western blot鑒定外泌體的特征性陽(yáng)性蛋白標(biāo)志物（HSP70抗原、Syntenin1抗原、CD9抗原、CD63抗原、及TSG101抗原）,陰性蛋白標(biāo)志物Grp94抗原);納米顆粒跟蹤分析儀分析BM-MSCs外泌體囊泡的直徑大小及分布規(guī)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
1.引言
2.材料與方法
4.結(jié)果
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝
綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體組織修復(fù)的研究進(jìn)展—以骨關(guān)節(jié)炎為例
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)后的活力檢測(cè)[J]. 孔根現(xiàn),蔣知新,沙杭,張清華.  中國(guó)組織工程研究. 2013(01)
[2]小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞SCA-1+/CD45+/CD31+亞群在心肌梗死中的作用[J]. 賀繼剛,沈振亞,滕小梅,余云生,葉文學(xué),黃浩岳,丁英龍.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2012(22)



本文編號(hào)：3700610