作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子（STAT）蛋白家族的成員之一,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）在細(xì)胞分化、免疫等眾多過程都發(fā)揮著重要的作用。該研究在克隆獲得日本七鰓鰻STAT3全長的基礎(chǔ)上,對其氨基酸序列與其他物種來源的STAT3氨基酸序列進(jìn)行了同源性比對,將日本七鰓鰻STAT3命名為L-STAT3。對L-STAT3基因分別進(jìn)行了原核和真核表達(dá),其中原核表達(dá)呈包涵體形式存在。根據(jù)畢赤酵母密碼子偏好性將L-STAT3核苷酸序列進(jìn)行了密碼子優(yōu)化,實(shí)現(xiàn)了L-STAT3在畢赤酵母中的分泌型表達(dá)。進(jìn)一步在轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)水平檢測了L-STAT3基因在七鰓鰻不同組織中的表達(dá)情況。該研究構(gòu)建了適用于日本七鰓鰻功能基因表達(dá)的畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng),為后續(xù)驗(yàn)證基因功能奠定了基礎(chǔ)。對于七鰓鰻L-STAT3基因表達(dá)模式的分析可為研究七鰓鰻適應(yīng)性免疫系統(tǒng)發(fā)育和調(diào)控的過程提供理論基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與培養(yǎng)基
        1.1.1 材料
        1.1.2 培養(yǎng)基
            (1)YPD(又稱YEPD)培養(yǎng)基包括:
            (2)BMGY/BMMY培養(yǎng)基基礎(chǔ)配方包括:
    1.2 日本七鰓鰻全長基因的克隆、同源性比對及進(jìn)化分析
    1.3 L-STAT3的原核表達(dá)
    1.4 L-STAT3畢赤酵母真核表達(dá)
        1.4.1 L-STAT3氨基酸序列的優(yōu)化及連接pPICZαA載體
        1.4.2 L-STAT3畢赤酵母表達(dá)體系的優(yōu)化
    1.5 畢赤酵母表達(dá)L-STAT3的鑒定
    1.6 L-STAT3基因的表達(dá)模式分析
2 結(jié)果
    2.1 日本七鰓鰻L-STAT3基因全長的克隆及表達(dá)
    2.2 L-STAT3的原核表達(dá)
    2.3 L-STAT3的真核表達(dá)
    2.4 L-STAT3基因的體內(nèi)表達(dá)分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]畢赤酵母外源蛋白分泌途徑的研究進(jìn)展[J]. 劉冰,黃志強(qiáng),鄭瀟,張建國.  微生物學(xué)雜志. 2019(04)
[2]新型重組畢赤酵母產(chǎn)人胰島素前體的表達(dá)工藝研究[J]. 彭強(qiáng)強(qiáng),劉啟,徐名強(qiáng),張?jiān)d,蔡孟浩.  中國生物工程雜志. 2019(07)
[3]密碼子優(yōu)化后的αB-晶狀體蛋白基因畢赤酵母重組質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)的初步研究[J]. 馮雪,高香,牛純青,劉堰.  中國生物工程雜志. 2017(07)
[4]米根霉脂肪酶基因pro-ROL和m-ROL在畢赤酵母中的密碼子優(yōu)化、表達(dá)和酶學(xué)性質(zhì)的比較分析（英文）[J]. 楊江科,嚴(yán)翔翔,黃日波,張搏.  生物工程學(xué)報(bào). 2011(12)



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