在高等脊椎動物中,有體液免疫和細胞免疫兩種免疫途徑,分別由B細胞和T細胞介導。B細胞受體（BCR）復合物CD79a/b上存在免疫受體酪氨酸激活基序（ITAM）,ITAMS基序上的酪氨酸殘基瞬時磷酸化,可以產(chǎn)生臨時結合位點以激活胞內(nèi)信號分子,實現(xiàn)BCR的跨膜信號轉導。在無頜類脊椎動物盡管沒有以TCR、BCR及MHC主導的適應性免疫系統(tǒng),但被發(fā)現(xiàn)通過新型可變淋巴細胞受體（variable lymphocyte receptor,VLR）形成了另一種類型的適應性免疫系統(tǒng),能夠產(chǎn)生免疫系統(tǒng)所需的多樣性豐富的抗原識別受體分子。但VLR受體如何實現(xiàn)跨膜信號轉導的分子機制尚未見報道。本研究首次在日本七鰓鰻中發(fā)現(xiàn)了一類新型含ITAM免疫球蛋白超家族受體（novel ITAM-containing immunogloblin superfamily receptors,NICIR）,并對其進行分子克隆得到完整的開放閱讀框（ORF）,命名為Lja-NICIR。Lja-NICIR的ORF全長為864 bp,編碼含有267個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。對LjaNICIR酶切位點進行分析,與表達載體pET-32a（+）... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 免疫受體酪氨酸激活基序
    1.2 BCR信號轉導途徑
        1.2.1 BCR信號轉導中Syk激酶的作用
        1.2.2 BCR信號轉導中Lyn的主要作用
        1.2.3 BCR信號轉導的不同結果
    1.3 TCR信號轉導途徑
        1.3.1 TCR信號轉導中LCK信號通路
        1.3.2 TCR信號轉導中PI3K信號通路
    1.4 七鰓鰻適應性免疫系統(tǒng)
第2章 七鰓鰻Lja-NICIR分子克隆及生物信息學分析
    2.1 材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑與藥品
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 七鰓鰻Lja-NICIR分子克隆方法
    2.3 結果
    2.4 日本七鰓鰻Lja-NICIR生物信息學分析
        2.4.1 一級結構分析
        2.4.2 功能結構域預測
        2.4.3 二級結構預測
    2.5 討論
    2.6 小結
第3章 七鰓鰻Lja-NICIR分子原核重組表達與蛋白質(zhì)純化
    3.1 材料
        3.1.1 實驗試劑與藥品
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 方法
        3.2.1 目的基因Lja-NICIR與表達載體p ET-32a(+)雙酶切
        3.2.2 目的基因Lja-NICIR與表達載體p ET-32a(+)瓊脂糖膠回收
        3.2.3 目的基因Lja-NICIR與表達載體p ET-32a(+)連接與轉化
        3.2.4 目的基因Lja-NICIR與表達載體p ET-32a(+)重組表達菌的篩選
        3.2.5 重組蛋白質(zhì)的誘導
        3.2.6 重組蛋白質(zhì)的純化
        3.2.7 重組蛋白質(zhì)濃度的測定及 His 標簽檢測
    3.3 結果
        3.3.1 目的基因Lja-NICIR與表達載體p ET-32a(+)連接
        3.3.2 Lja-NICIR重組蛋白質(zhì)的誘導
        3.3.3 Lja-NICIR重組蛋白質(zhì)濃度的測定
    3.4 討論
    3.5 小結
第4章 七鰓鰻Lja-NICIR多克隆抗體制備及其鑒定
    4.1 材料
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑與藥品
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 方法
        4.2.1 免疫方法
        4.2.2 ELISA檢測抗體效價
        4.2.3 Lja-NICIR多克隆抗體純化
        4.2.4 重組蛋白多克隆抗體濃度的測定
        4.2.5 重組蛋白多克隆抗體特異性檢測
    4.3 結果
        4.3.1 Lja-NICIR多克隆抗體效價檢測
        4.3.2 Lja-NICIR多克隆抗體濃度測定
        4.3.3 Lja-NICIR重組蛋白多克隆抗體特異性檢測
    4.4 討論
    4.5 小結
第5章 七鰓鰻Lja-NICI基因相關免疫功能研究
    5.1 材料
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗試劑與藥品
        5.1.3 實驗儀器
    5.2 方法
        5.2.1 日本七鰓鰻免疫方法
        5.2.2 日本七鰓鰻的白細胞（淋巴細胞）及鰓髓樣小體的提取
        5.2.3 Lja-NICIR基因相關免疫功能研究
    5.3 實驗結果
        5.3.1 Lja-NICIR基因si RNA的敲低效果檢測
        5.3.2 在LPS和PHA免疫下Lja-NICIR基因的檢測
    5.4 討論
    5.5 小結
結論
本論文創(chuàng)新點
參考 文獻
附錄A Pet32a（+）質(zhì)粒圖譜
攻讀碩士學位期間發(fā)表學士論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Lamprey: a model for vertebrate evolutionary research[J]. Yang XU,Si-Wei ZHU,Qing-Wei LI.  動物學研究. 2016(05)



本文編號：3688344