3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）是鹽藻（Dunaliella salina）甘油合成途徑上的關(guān)鍵酶,本研究首次報道了一條胞質(zhì)型GPDH基因的克�。麨镈s GPDH1）,經(jīng)大腸桿菌表達(dá)和融合蛋白的純化及性質(zhì)鑒定,也研究了在鹽脅迫期間DsGPDH1和DsGPDH2的表達(dá)變化。研究發(fā)現(xiàn)DsGPDH1和DsGPDH2相比,少了一段信號肽序列,但包含完整的SerB結(jié)構(gòu)域和GPDH結(jié)構(gòu)域。通過大腸桿菌制備的融合DsGPDH1蛋白高度可溶,但卻沒有NADH依賴的脫氫酶活性,其SerB結(jié)構(gòu)域是否具有磷酸化酶的活性還沒有研究清楚。在高鹽脅迫時DsGPDH1和DsGPDH2都表現(xiàn)出誘導(dǎo)性高表達(dá),在低鹽脅迫時,DsGPDH1的表達(dá)被高度抑制,但DsGPDH2的表達(dá)變化卻不太明顯。GPDH同工酶在鹽藻甘油合成中的具體分工仍然不清楚,但本研究邁出了堅實的一步。 

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【部分圖文】：

Ds GPDH1的啟動子區(qū)

Ds GPDH1和Ds GPDH2的比較

對于3"RACE，使用Oligo-d T引物(Ta Ka Ra)進(jìn)行c DNA第一條鏈的合成，用以下基因特異性引物進(jìn)行Ds GPDH1 c DNA的3"末端的PCR擴(kuò)增：3RPs1 (5"-C TCTGGCAACTTGGAAGAGGTGGC-"3),3RPs2 (實際為Est Ps)(5"-CAAGGTCAAGCGAGATGCC-3")和3 sites Adaptor primers (Ta Ka Ra公司)(Ta Ka Ra)。采用c DNA為模版，使用引物3RPs1和3sites Adaptor inner primer進(jìn)行第一輪PCR擴(kuò)增；第一輪的擴(kuò)增產(chǎn)物以1∶100的比例稀釋后用作第二輪PCR擴(kuò)增的模版，并用引物3RPs2和3sites Adaptor inner primer進(jìn)行第二輪擴(kuò)增。擴(kuò)增片段克隆至p MD18-T載體，并送出測序。圖4 Ds GPDH1和Ds GPDH2的脅迫誘導(dǎo)表達(dá)


本文編號：3646023