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香樟甲羥戊酸-5-磷酸激酶基因CcPMK的克隆和表達(dá)分析

發(fā)布時間:2022-02-26 14:03
  甲羥戊酸-5-磷酸激酶(5-phosphomevalonate kinase,PMK)是甲羥戊酸(mevalonate,MVA)途徑中的關(guān)鍵限速酶,其在ATP和二價金屬離子的存在下能夠可逆地催化甲羥戊酸-5-磷酸(mevalerate 5-phosphoric acid,MVAP)磷酸化從而形成甲羥戊酸-5-焦磷酸(mevalonate-5-pyrophosphate,MVAPP)。該文以香樟Cinnamomum camphora作為研究材料,基于前期的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),從cDNA中克隆出PMK基因,命名為CcPMK(GenBank登錄號MN163057)。該基因開放閱讀框(ORF)為1 545 bp,編碼514個氨基酸,生物信息學(xué)分析推測其相對分子質(zhì)量為56.14 kDa,等電點(diǎn)(theoretical pI)為7.64,不含信號肽,不存在跨膜結(jié)構(gòu)。通過多序列比對及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析,發(fā)現(xiàn)CcPMK與其他植物的PMK氨基酸序列相似性高達(dá)75%,其包含45%的α-螺旋和16%的β折疊,CcPMK具有3個PMK蛋白質(zhì)家族的特征motif和1個ATP結(jié)合位點(diǎn)Gly-Leu-Gly-Ser-Ser-A... 

【文章來源】:中國中藥雜志. 2020,45(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】:7 頁

【文章目錄】:
1 材料
    1.1 植物
    1.2 儀器
    1.3 試劑
2 方法
    2.1 總RNA的提取
    2.2 cDNA的合成
    2.3 cDNA全長的獲得
    2.4 克隆載體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)化及鑒定
    2.5 生物信息學(xué)分析
    2.6 qRT-PCR檢測
3 結(jié)果
    3.1 總RNA的提取及檢測
    3.2 CcPMK基因cDNA全長的克隆
    3.3 CcPMK蛋白的生物信息學(xué)分析
        3.3.1 理化性質(zhì)分析
        3.3.2 序列比對及結(jié)構(gòu)域分析
        3.3.3 系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
    3.4 CcPMK基因的特異性表達(dá)分析
4 討論


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]茉莉花磷酸甲羥戊酸激酶基因克隆及表達(dá)分析[J]. 陳笛,王鵬杰,鄭玉成,鄭知臨,陳桂信,葉乃興.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2018(10)
[2]香樟GGPPS基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 曹先爽,王進(jìn),張瑤瑤,王煜煒,馬曉江,宋麗,湯鋒,岳永德.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(08)
[3]香樟FPPS基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 張瑤瑤,宋麗,劉偉,曹先爽,王煜煒,王進(jìn).  分子植物育種. 2018(19)
[4]梅州香樟揮發(fā)油抗炎活性試驗(yàn)[J]. 葉小玲,趙瑩,張聲源,張偉楠,饒頌華,聶華.  廣東化工. 2018(08)
[5]香樟MK基因的克隆與生物信息學(xué)分析[J]. 曹先爽,王進(jìn),張瑤瑤,王煜煒,馬曉江,宋麗,湯鋒,岳永德.  熱帶作物學(xué)報. 2017(12)
[6]植物萜類合成代謝途徑及限速酶的研究進(jìn)展[J]. 陳瑤,謝琴鼎,唐亞琴,唐開宇,黃乾明.  分子植物育種. 2018(07)
[7]APGⅣ系統(tǒng)在植物學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用初探[J]. 劉文哲,趙鵬.  高等理科教育. 2017(04)
[8]4種樟屬植物精油抗氧化活性的比較研究[J]. 羅世惠,黃婷,史宗畔,陳代俐,陳斌,何正波.  重慶師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(01)
[9]金釵石斛焦磷酸甲羥戊酸脫羧酶基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 李清,李標(biāo),郭順星.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(02)
[10]香樟1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶基因CcDXR1的克隆和表達(dá)分析[J]. 鄭漢,荊禮,姚娜,楊青山,彭華勝,申業(yè),黃璐琦.  藥學(xué)學(xué)報. 2016(09)

碩士論文
[1]茯苓磷酸甲羥戊酸激酶基因克隆及功能分析[D]. 何海.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



本文編號:3644626

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