β-伴大豆球蛋白α-亞基核心區(qū)的基因克
發(fā)布時(shí)間：2022-01-04 19:33
利用RT-PCR技術(shù)獲得了齊黃34大豆種子的全長cDNA,采用自行設(shè)計(jì)的引物對(duì)目的基因αc進(jìn)行擴(kuò)增,并將目的基因與載體連接,構(gòu)建了重組克隆載體pGEM-αc。重組克隆載體經(jīng)XhoⅠ/EcoRⅠ雙限制酶酶切鑒定后,與載體pET-28a連接構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-αc,經(jīng)菌落PCR、雙限制酶酶切及測(cè)序判定準(zhǔn)確后,將其轉(zhuǎn)入到感受態(tài)細(xì)胞E.coli BL21（DE3）中,當(dāng)誘導(dǎo)溫度為37℃、菌液OD600nm值為0.8、誘導(dǎo)劑（IPTG）濃度為0.2mmol/L,誘導(dǎo)時(shí)間為9h時(shí),重組α-亞基核心區(qū)蛋白分子質(zhì)量為50kU;工程菌pET-28a-αc-BL21經(jīng)超聲破裂、低溫離心后,上清液利用鎳離子親和層析色譜柱經(jīng)AKTA蛋白純化系統(tǒng)純化可以獲得較高純度的目的蛋白。
【文章來源】：食品與機(jī)械. 2020,36(05)北大核心
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
大豆總RNA提取電泳圖
目的基因片段α-亞基核心區(qū)的擴(kuò)增結(jié)果
由圖3可知，采用自行設(shè)計(jì)的特異性引物F1/R1對(duì)隨機(jī)選取的5個(gè)菌株擴(kuò)增得到的片段長度均為1 300bp左右，與目的基因的理論值相一致；而使用通用引物M47/M48擴(kuò)增得到的片段長度為2 000bp左右，是因?yàn)樘禺愋砸锱c通用引物的位點(diǎn)中間有一定的片段大小，因此該結(jié)果也與理論值相符。理論上而言，重組克隆載體經(jīng)單酶切后應(yīng)形成清晰而單一的條帶，但pGEM-αc經(jīng)EcoRⅠ單酶切后形成兩個(gè)清晰條帶，其大小分別與克隆載體和目的基因的理論值相符，是因?yàn)檫x用的克隆載體pGEM-T Easy上帶有EcoRⅠ酶切位點(diǎn)；重組克隆載體經(jīng)XhoⅠ單酶切后能形成單一條帶，證實(shí)重組克隆載體構(gòu)建成功；而經(jīng)雙酶切后重組克隆載體被切成兩個(gè)較為清晰的條帶，且大小分別為3 000bp與1 300bp左右，與載體pGEM-T Easy(3 015bp）和目的基因α-亞基核心區(qū)的理論值（1 265bp）相符。2.4 重組表達(dá)載體的構(gòu)建、篩選及鑒定
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大腸桿菌中的融合表達(dá)[J]. 李旺,史敦勝,丁軻,曹平華,趙龍妹. 食品與機(jī)械. 2019(07)
[2]水稻脫落酸受體PYL2與mNeonGreen融合蛋白的原核表達(dá)及純化[J]. 吳云華,吳亞婷,李勇. 中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(02)
[3]重組MBP-SUV39H1在大腸桿菌中表達(dá)與純化[J]. 李劍,李丕龍. 生物技術(shù). 2019(01)
[4]茶渣硒蛋白的分離純化及其性質(zhì)研究[J]. 楊旭,謝盈. 食品與機(jī)械. 2018(11)
[5]重組大豆7S球蛋白α′-亞基的分離純化[J]. 余少璟,許妍妍,袁艷秋,周星杰,吉夢(mèng)瑩,欒廣忠. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(12)
[6]羧甲基纖維素鈉對(duì)大豆蛋白凝膠特性的影響[J]. 苗鐘化,辛宜聰,曾瑞琪,鄭炯. 食品與機(jī)械. 2017(04)
[7]β-伴大豆球蛋白α′-亞基的基因克隆及原核表達(dá)[J]. 許妍妍,董宇,王新,彭飛,孫曉靜,余少璟,辰巳英三,欒廣忠. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(02)
[8]植物乳桿菌DMDL 9010中亞硝酸鹽還原酶的基因克隆、表達(dá)和純化[J]. 王盼,費(fèi)永濤,劉冬梅,黃娟,吳暉,余以剛,唐語謙,肖性龍. 現(xiàn)代食品科技. 2015(06)
[9]Mincle受體蛋白克隆、原核表達(dá)與純化[J]. 嚴(yán)萍,朱喜梅,李璐,林文華,詹若挺,唐語謙. 現(xiàn)代食品科技. 2015(03)
[10]重組人胰島素類似物蛋白在大腸桿菌中克隆、表達(dá)與純化[J]. 楊寧,趙凌俠,唐克軒. 武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(03)
博士論文
[1]堿性蛋白酶Alcalase凝固豆?jié){機(jī)理的研究[D]. 欒廣忠.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
碩士論文
[1]7S大豆球蛋白α’-亞基的原核表達(dá)及純化[D]. 許妍研.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
本文編號(hào)：3568938
【文章來源】：食品與機(jī)械. 2020,36(05)北大核心
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
大豆總RNA提取電泳圖
目的基因片段α-亞基核心區(qū)的擴(kuò)增結(jié)果
由圖3可知，采用自行設(shè)計(jì)的特異性引物F1/R1對(duì)隨機(jī)選取的5個(gè)菌株擴(kuò)增得到的片段長度均為1 300bp左右，與目的基因的理論值相一致；而使用通用引物M47/M48擴(kuò)增得到的片段長度為2 000bp左右，是因?yàn)樘禺愋砸锱c通用引物的位點(diǎn)中間有一定的片段大小，因此該結(jié)果也與理論值相符。理論上而言，重組克隆載體經(jīng)單酶切后應(yīng)形成清晰而單一的條帶，但pGEM-αc經(jīng)EcoRⅠ單酶切后形成兩個(gè)清晰條帶，其大小分別與克隆載體和目的基因的理論值相符，是因?yàn)檫x用的克隆載體pGEM-T Easy上帶有EcoRⅠ酶切位點(diǎn)；重組克隆載體經(jīng)XhoⅠ單酶切后能形成單一條帶，證實(shí)重組克隆載體構(gòu)建成功；而經(jīng)雙酶切后重組克隆載體被切成兩個(gè)較為清晰的條帶，且大小分別為3 000bp與1 300bp左右，與載體pGEM-T Easy(3 015bp）和目的基因α-亞基核心區(qū)的理論值（1 265bp）相符。2.4 重組表達(dá)載體的構(gòu)建、篩選及鑒定
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大腸桿菌中的融合表達(dá)[J]. 李旺,史敦勝,丁軻,曹平華,趙龍妹. 食品與機(jī)械. 2019(07)
[2]水稻脫落酸受體PYL2與mNeonGreen融合蛋白的原核表達(dá)及純化[J]. 吳云華,吳亞婷,李勇. 中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(02)
[3]重組MBP-SUV39H1在大腸桿菌中表達(dá)與純化[J]. 李劍,李丕龍. 生物技術(shù). 2019(01)
[4]茶渣硒蛋白的分離純化及其性質(zhì)研究[J]. 楊旭,謝盈. 食品與機(jī)械. 2018(11)
[5]重組大豆7S球蛋白α′-亞基的分離純化[J]. 余少璟,許妍妍,袁艷秋,周星杰,吉夢(mèng)瑩,欒廣忠. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(12)
[6]羧甲基纖維素鈉對(duì)大豆蛋白凝膠特性的影響[J]. 苗鐘化,辛宜聰,曾瑞琪,鄭炯. 食品與機(jī)械. 2017(04)
[7]β-伴大豆球蛋白α′-亞基的基因克隆及原核表達(dá)[J]. 許妍妍,董宇,王新,彭飛,孫曉靜,余少璟,辰巳英三,欒廣忠. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(02)
[8]植物乳桿菌DMDL 9010中亞硝酸鹽還原酶的基因克隆、表達(dá)和純化[J]. 王盼,費(fèi)永濤,劉冬梅,黃娟,吳暉,余以剛,唐語謙,肖性龍. 現(xiàn)代食品科技. 2015(06)
[9]Mincle受體蛋白克隆、原核表達(dá)與純化[J]. 嚴(yán)萍,朱喜梅,李璐,林文華,詹若挺,唐語謙. 現(xiàn)代食品科技. 2015(03)
[10]重組人胰島素類似物蛋白在大腸桿菌中克隆、表達(dá)與純化[J]. 楊寧,趙凌俠,唐克軒. 武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(03)
博士論文
[1]堿性蛋白酶Alcalase凝固豆?jié){機(jī)理的研究[D]. 欒廣忠.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
碩士論文
[1]7S大豆球蛋白α’-亞基的原核表達(dá)及純化[D]. 許妍研.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
本文編號(hào)：3568938
本文鏈接：http://sikaile.net/projectlw/swxlw/3568938.html
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