目的:本課題組前期報(bào)道心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白（cardiac fatty acid binding protein,FABP3）可通過(guò)抑制小鼠心室肌細(xì)胞舒張期舒張過(guò)程中的鈣再攝取（或鈣回收）從而抑制心肌細(xì)胞收縮能力。但是,在現(xiàn)階段FABP3抑制鈣回收的詳細(xì)機(jī)制尚不清楚。肌漿網(wǎng)鈣離子泵（sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA）是負(fù)責(zé)心臟舒張鈣再攝取的主要蛋白質(zhì),已知SERCA的活性可以通過(guò)多種機(jī)制的調(diào)節(jié)。其中附屬蛋白結(jié)合可能是主要機(jī)制。眾所周知受磷蛋白PLB（phospholamban）可與SERCA結(jié)合,并且PKA（protein kinase A）介導(dǎo)的PLB磷酸化是導(dǎo)致PLB與SERCA解離并引起SERCA活化的主要機(jī)制。因此,本項(xiàng)目旨在進(jìn)一步探索FABP3如何調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞中SERCA的活性。方法:1.本實(shí)驗(yàn)使用飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境中的健康C57BL/6小鼠,12-14周齡。2.免疫共沉淀,研究FABP3與PLB是否結(jié)合。3.通過(guò)鈣成像技術(shù)研究小鼠左室心肌細(xì)胞鈣瞬變的動(dòng)力學(xué)變化。4.觀察FABP3給藥條件下心肌細(xì)胞鈣瞬變變化。5... 

【文章來(lái)源】：河北醫(yī)科大學(xué)河北省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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FABP3促進(jìn)PLB和SERCA之間的結(jié)合

20圖1FABP3抑制小鼠心室肌細(xì)胞鈣回收速率Fig.1FABP3inhibitscalciumrecoveryrateofmouseventricularmyocytes2.FABP3可以促進(jìn)PLB和SERCA之間的結(jié)合由于PLB解離是SERCA活化的主要機(jī)制，接下來(lái)我們檢驗(yàn)了FABP3是否參與調(diào)節(jié)PLB與SERCA的結(jié)合。急性分離小鼠心室肌細(xì)胞，獲得心室肌細(xì)胞后，用5nmol/L的FABP3進(jìn)行孵育細(xì)胞，然后進(jìn)行免疫沉淀，結(jié)果表明與對(duì)照組相比，F(xiàn)ABP3促進(jìn)PLB和SERCA之間的結(jié)合（見(jiàn)圖2）。該結(jié)果提示，F(xiàn)ABP3有可能是通過(guò)促使PLB與SERCA的結(jié)合從而抑制SERCA活性，降低鈣回收速率。圖2FABP3促進(jìn)PLB和SERCA之間的結(jié)合Fig.2FABP3promotestheconnectionbetweenPLBandSERCA*

213.FABP3對(duì)PLB的PKA磷酸化無(wú)影響，但顯著改變PKA介導(dǎo)的RyR2磷酸化PKA介導(dǎo)的PLB磷酸化是調(diào)節(jié)PLB與SERCA親和力的主要機(jī)制之一，而且我們前期的數(shù)據(jù)表明FABP3可以在細(xì)胞內(nèi)局部增加PKA活性。因此接下來(lái)我們檢驗(yàn)了FABP3是否影響PLB磷酸化水平。急性分離小鼠心室肌細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組用5nmol/L的FABP3孵育細(xì)胞30分鐘，然后與對(duì)照組同時(shí)裂解，進(jìn)行WesternBlot，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析檢測(cè)不同蛋白的表達(dá)情況。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組對(duì)PLB的16位點(diǎn)磷酸化無(wú)顯著性影響（P=0.905）。作為陽(yáng)性對(duì)照，我們同時(shí)檢驗(yàn)了肌漿網(wǎng)鈣釋放通道RyR2磷酸化情況。我們發(fā)現(xiàn)FABP3孵育顯著性升高RyR2的2808位點(diǎn)磷酸化（P<0.05）（見(jiàn)圖3A，3B）。我們的數(shù)據(jù)提示，雖然FABP3可以激活PKA磷酸化通路，但是PLB磷酸化并未顯著性受到FABP3影響。圖3AFABP3對(duì)PKA介導(dǎo)的PLB磷酸化沒(méi)有顯著影響Fig.3AFABP3hasnosignificanteffectonPKA-mediatedPLBphosphorylation（n=3，P=0.905）


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