發(fā)布時間：2022-01-04 04:09

　　研究背景及目的:間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）屬于多能干細(xì)胞,具有良好的增殖能力及多向分化潛能,其在特定的誘導(dǎo)條件下,可向多種細(xì)胞定向分化,繼而分化成骨、軟骨、肌肉、脂肪等組織。在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,間充質(zhì)干細(xì)胞被作為理想的種子細(xì)胞用于骨組織工程,主要應(yīng)用于骨質(zhì)疏松、難愈合性骨折等疾病的治療。永生化小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（immortalized mouse embryonic fibroblasts,iMEF）具備間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)生物特性,具有自我更新和多向分化潛能,同時可以通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或基因改造來表達(dá)異位基因,是分析基因功能的合適的細(xì)胞模型,多被用作為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的代生干細(xì)胞模型,以研究中胚層細(xì)胞的分化機(jī)制。黏著斑激酶（Focal adhesion kinase,FAK）是胞質(zhì)內(nèi)非受體蛋白酪氨酸激酶,集中在粘著斑附近,通過整合來自細(xì)胞外壓力、營養(yǎng)、細(xì)胞黏著等多方面的信號,參與調(diào)控多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移和血管生成,尤其在腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。此外,目前已證實(shí)的參與影響成骨細(xì)胞成骨分化過程的相關(guān)物理因素如磁場、超聲波等,化學(xué)因子如一... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1Westernblot分別檢測iMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-細(xì)胞FAK蛋白的表達(dá)

黏著斑激酶在誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞成骨分化過程中的作用及機(jī)制142.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，計(jì)量資料采用X±S表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。2.3結(jié)果2.3.1iMEFFAK+/+細(xì)胞及iMEFFAK-/-細(xì)胞的鑒定取相同規(guī)格培養(yǎng)皿中iMEFFAK+/+細(xì)胞及iMEFFAK-/-細(xì)胞，在RIPA裂解液下裂解，經(jīng)BCA蛋白定量后，進(jìn)行Westernblot實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖2.3.1所示：iMEFFAK+/+細(xì)胞株的FAK蛋白表達(dá)陽性，iMEFFAK-/-細(xì)胞株FAK蛋白表達(dá)陰性。通過該實(shí)驗(yàn)證實(shí)黏著斑激酶存在并表達(dá)于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，同時也對細(xì)胞株進(jìn)行了有效的鑒別，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。圖2.3.1Westernblot分別檢測iMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-細(xì)胞FAK蛋白的表達(dá)Figure2.3.1TheexpressionofFAKproteininiMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-cellswasdetectedbyWesternblot2.3.2iMEFFAK+/+細(xì)胞及iMEFFAK-/-細(xì)胞形態(tài)差異倒置顯微鏡下觀察iMEFFAK+/+細(xì)胞及iMEFFAK-/-細(xì)胞形態(tài)的差異，結(jié)果如圖2.3.2所示：iMEFFAK+/+細(xì)胞為貼壁生長的多突的紡錘形或星形的扁平細(xì)胞，多呈多角形，呈集落樣生長。iMEFFAK-/-細(xì)胞較iMEFFAK+/+體積明顯縮小且多呈梭形。圖2.3.2光學(xué)顯微鏡下iMEFFAK+/+細(xì)胞及iMEFFAK-/-細(xì)胞形態(tài)改變（×200）Figure2.3.2MorphologicalchangesbetweeniMEFFAK+/+andiMEFFAK-/-cellsunderlightmicroscope（×200）

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文2.3.3 iMEFFAK+/+細(xì)胞及 iMEFFAK-/-細(xì)胞功能差異分別采用劃痕實(shí)驗(yàn)及 Cell Counting Kit-8 實(shí)驗(yàn)檢測并對比 iMEFFAK+/+細(xì)胞及iMEFFAK-/-細(xì)胞的遷移及增殖能力。結(jié)果如圖 2.3.3.1、圖 2.3.3.2 A B 所示：iMEFFAK-/-細(xì)胞的遷移及增殖能力較 iMEFFAK+/+細(xì)胞均有不同程度下降。


本文編號：3567631