蜱傳腦炎病毒（TBEV）報(bào)告病毒載體的構(gòu)建及活性檢測(cè)
發(fā)布時(shí)間：2022-01-03 16:57
蜱傳腦炎病毒（TBEV）是一種重要的蜱傳病毒,與黃熱病病毒（YFV）、登革病毒（DENV）、寨卡病毒（ZIKV）等同屬黃病毒科黃病毒屬,是正鏈RNA病毒。感染TBEV可能會(huì)引發(fā)腦膜炎,腦炎和腦膜腦炎,嚴(yán)重可導(dǎo)致終身神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥,這些癥狀統(tǒng)稱為蜱傳腦炎（TBE）。自1937年前蘇聯(lián)科學(xué)家在蘇聯(lián)上報(bào)該病以后,陸續(xù)在歐洲、西伯利亞、俄羅斯、中國(guó)北部和日本等至少34個(gè)國(guó)家都發(fā)現(xiàn)了這種病。TBE每年的發(fā)病率仍在上升,而且相比其他蚊媒傳播的黃病毒,對(duì)TBEV等蜱傳病毒的了解很少。因此研究TBEV與宿主細(xì)胞的相互作用,分子生物學(xué)等特性仍然十分有必要。報(bào)告病毒是監(jiān)測(cè)病毒、研究病毒毒力、抗病毒藥物篩選中經(jīng)常用到的有力工具,然而目前還未見(jiàn)有關(guān)TBEV報(bào)告病毒的相關(guān)報(bào)道。本文主要進(jìn)行了以下兩方面的工作:TBEV Nluc報(bào)告病毒載體的構(gòu)建及活性檢測(cè);TBEV miRFP670nano報(bào)告病毒的構(gòu)建及活性檢測(cè)。一、TBEV Nluc報(bào)告病毒載體的構(gòu)建及活性檢測(cè)Nluc基因是熒光素酶領(lǐng)域新開(kāi)發(fā)出的一個(gè)基因,該基因有分子量小、靈敏度高等特點(diǎn)。構(gòu)建含有Nluc報(bào)告基因的TBEV報(bào)告病毒,報(bào)告基因的插入位點(diǎn)在TBE...
【文章來(lái)源】：遼寧大學(xué)遼寧省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖0-1TBE在世界的分布[5]
圖0-2TBE在中國(guó)的分布
引言7和膜的非傳染性顆粒的產(chǎn)生來(lái)阻止TBEV的組裝[84]。一旦NCs組裝好，它們通過(guò)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔獲得脂質(zhì)膜。此時(shí)的病毒粒子尚未成熟，這一過(guò)程也可以在沒(méi)有NC的情況下發(fā)生，因?yàn)楫a(chǎn)生NC缺陷的亞病毒顆粒是黃病毒感染的正常部分[85]。在未成熟的粒子通過(guò)出芽進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)之后，它們通過(guò)高爾基體和跨高爾基體網(wǎng)絡(luò)（TGN），在TGN中，粒子暴露在低pH下，導(dǎo)致（prM-E）構(gòu)象發(fā)生重大變化。隨著三聚體的解離，尖尖的未成熟顆粒轉(zhuǎn)變?yōu)楣饣摹邦A(yù)成熟”顆粒，prM-E二聚體進(jìn)一步二聚，形成與成熟顆粒相似的結(jié)構(gòu)。唯一的區(qū)別是pr肽的存在，它仍然位于融合肽的頂部[86-88]。這種重排開(kāi)始于一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的成核中心，而不是同時(shí)發(fā)生在整個(gè)粒子上，否則會(huì)導(dǎo)致空間碰撞[89]。在構(gòu)象改變后，通過(guò)宿主弗林蛋白酶從prM中切割pr肽來(lái)完成成熟。在未成熟顆粒中，prM-弗林蛋白酶斷裂位點(diǎn)不可接近。在pH介導(dǎo)的構(gòu)象變化后，它暴露在外，pr肽被裂解。然而，在TGN的酸性pH下，它仍然與E-M-M-E雜四聚體結(jié)合。因此，它仍然掩蓋融合環(huán)，防止與TGN膜過(guò)早融合。pr肽只有在病毒通過(guò)胞內(nèi)吞作用離開(kāi)細(xì)胞到達(dá)中性胞外環(huán)境后才能與病毒分離。Pr肽解離引發(fā)病毒融合，從而使其具有傳染性[86-87,90-91]。黃病毒的成熟過(guò)程并不總是完整的，這導(dǎo)致感染細(xì)胞產(chǎn)生未成熟和部分成熟的顆粒。完全未成熟的顆粒不具傳染性，因?yàn)樗鼈儫o(wú)法融合，但部分成熟的顆�？筛腥拘录�(xì)胞[92-93]。圖0-3TBEV粒子模式圖
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Tick-Borne Viruses[J]. Junming Shi,Zhihong Hu,Fei Deng,Shu Shen. Virologica Sinica. 2018(01)
[2]Tick-borne encephalitis: A review of epidemiology, clinical characteristics, and management[J]. Petra Bogovic,Franc Strle. World Journal of Clinical Cases. 2015(05)
[3]蜱傳腦炎病毒傳播的生態(tài)鏈[J]. 楊正時(shí). 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志. 2012(01)
[4]黑龍江省森林腦炎疫情趨勢(shì)分析[J]. 張殿鴻,張志學(xué),王耀明,王德煥. 疾病監(jiān)測(cè). 2000(02)
本文編號(hào)：3566633
【文章來(lái)源】：遼寧大學(xué)遼寧省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖0-1TBE在世界的分布[5]
圖0-2TBE在中國(guó)的分布
引言7和膜的非傳染性顆粒的產(chǎn)生來(lái)阻止TBEV的組裝[84]。一旦NCs組裝好，它們通過(guò)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔獲得脂質(zhì)膜。此時(shí)的病毒粒子尚未成熟，這一過(guò)程也可以在沒(méi)有NC的情況下發(fā)生，因?yàn)楫a(chǎn)生NC缺陷的亞病毒顆粒是黃病毒感染的正常部分[85]。在未成熟的粒子通過(guò)出芽進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)之后，它們通過(guò)高爾基體和跨高爾基體網(wǎng)絡(luò)（TGN），在TGN中，粒子暴露在低pH下，導(dǎo)致（prM-E）構(gòu)象發(fā)生重大變化。隨著三聚體的解離，尖尖的未成熟顆粒轉(zhuǎn)變?yōu)楣饣摹邦A(yù)成熟”顆粒，prM-E二聚體進(jìn)一步二聚，形成與成熟顆粒相似的結(jié)構(gòu)。唯一的區(qū)別是pr肽的存在，它仍然位于融合肽的頂部[86-88]。這種重排開(kāi)始于一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的成核中心，而不是同時(shí)發(fā)生在整個(gè)粒子上，否則會(huì)導(dǎo)致空間碰撞[89]。在構(gòu)象改變后，通過(guò)宿主弗林蛋白酶從prM中切割pr肽來(lái)完成成熟。在未成熟顆粒中，prM-弗林蛋白酶斷裂位點(diǎn)不可接近。在pH介導(dǎo)的構(gòu)象變化后，它暴露在外，pr肽被裂解。然而，在TGN的酸性pH下，它仍然與E-M-M-E雜四聚體結(jié)合。因此，它仍然掩蓋融合環(huán)，防止與TGN膜過(guò)早融合。pr肽只有在病毒通過(guò)胞內(nèi)吞作用離開(kāi)細(xì)胞到達(dá)中性胞外環(huán)境后才能與病毒分離。Pr肽解離引發(fā)病毒融合，從而使其具有傳染性[86-87,90-91]。黃病毒的成熟過(guò)程并不總是完整的，這導(dǎo)致感染細(xì)胞產(chǎn)生未成熟和部分成熟的顆粒。完全未成熟的顆粒不具傳染性，因?yàn)樗鼈儫o(wú)法融合，但部分成熟的顆�？筛腥拘录�(xì)胞[92-93]。圖0-3TBEV粒子模式圖
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Tick-Borne Viruses[J]. Junming Shi,Zhihong Hu,Fei Deng,Shu Shen. Virologica Sinica. 2018(01)
[2]Tick-borne encephalitis: A review of epidemiology, clinical characteristics, and management[J]. Petra Bogovic,Franc Strle. World Journal of Clinical Cases. 2015(05)
[3]蜱傳腦炎病毒傳播的生態(tài)鏈[J]. 楊正時(shí). 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志. 2012(01)
[4]黑龍江省森林腦炎疫情趨勢(shì)分析[J]. 張殿鴻,張志學(xué),王耀明,王德煥. 疾病監(jiān)測(cè). 2000(02)
本文編號(hào)：3566633
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