在真核生物中,蛋白激酶參與調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的許多關(guān)鍵方面,包括細(xì)胞分裂、細(xì)胞代謝和對(duì)外界信號(hào)的反應(yīng)等。鈣依賴蛋白激酶CPKs/CDPKs（Ca2+-dependent protein kinases）是一類依賴Ca2+的蛋白激酶,是植物和某些原生動(dòng)物Ca2+信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中主要的傳遞者,能識(shí)別發(fā)育和環(huán)境刺激引發(fā)的Ca2+信號(hào),將其轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)磷酸化事件。在植物中,CPKs/CDPKs是一個(gè)多基因家族,其調(diào)控機(jī)制非常復(fù)雜。近年來,對(duì)植物CPKs/CDPKs在免疫和應(yīng)激信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中觸發(fā)多樣的下游反應(yīng)的功能有很多研究,但其活力調(diào)控機(jī)制仍不清楚。本論文對(duì)擬南芥鈣依賴蛋白激酶（AtCPKs）和原生動(dòng)物弓形蟲CDPK1（TgCDPK1）的活力調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了初步研究。CPKs/CDPKs大多由N端可變區(qū)域、絲/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域KD（Kinase Domain）、連接區(qū)域J（Junction）以及C端的類鈣調(diào)蛋白結(jié)構(gòu)域CLD（Calmodulin-like Domain）構(gòu)成。不同亞組的AtCPKs基因由擬南芥cDNA文庫克隆獲得,TgCDPK1基因經(jīng)密碼子優(yōu)化后合成。在此基礎(chǔ)上,我們克隆了多個(gè)AtCPKs及... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１經(jīng)典蛋白激酶結(jié)構(gòu)??圖Ａ為ＰＫＡ的晶體結(jié)構(gòu)⑴：圖Ｂ為磷酸化和非磷酸化的ＩＲＫ的晶體結(jié)構(gòu)［２］，??活化環(huán)為紅，ａＣ螺旋為色，Ｇｌ－ｒｉｃｈｌｏｏ為桔紅色，化環(huán)綠，??

?Ｓｅｎｓｏｒ?ｒｅｌａｙｓ??廣、、??ＣＤＰＫ?ｔ?＼?＂?ＣａＭ??（ｉ?ｒｍ?▼?（ｉ?ｉ?ｉ?ｎ??Ｃａ２＋?ｃｍｌ??＇?ＣＢＬ?１?＾??ＣＩＰＫ?，?ＬＩ?１?Ｉ?Ｉ?Ｊ?（?１?ｉ?Ｉ?ｉ）??（‘ｉＵｉ?Ｊ?ｎ?ｉ?１１?ｉ?ｉ?ｉ??ＰｈｏｓｐｈｏｒｙｉａｔｏＮ－－－＾？?Ｔａｒｇｅｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?Ｍ一＊??潑?Ｋｉｎａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ?■?ＥＦ－ｈａｎｄ?■?Ａｕｔｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ?ｄｏｍａｉｎ?■?ＮＡＦ?ｄｏｍａｉｎ??圖１．２植物里Ｃａ２‘感應(yīng)蛋白分類Ｗ??１．３?ＣＤＰＫｓ?家族??１Ｊ．１?ＣＤＰＫｓ的分類與定位??ＣＤＰＫｓ足？個(gè)多基因家族，要存弁：于各種植物和原生動(dòng)物里，在動(dòng)物和??真菌中沒有發(fā)現(xiàn)。目前水稻里鑒定出３１種，玉米里鑒定出３５種，小麥里鑒定出??至少２０種，擬南芥基因組里鑒定出３４種％擬南芥ＣＤＰＫｓ簡(jiǎn)稱為ＡｔＣＰＫｓ。擬??南芥電所冇ＣＰＫｓ和原生動(dòng)物里ＴｇＣＤＰＫ丨根據(jù)其全長(zhǎng)鉍袖酸丨十：列同源性劃分的??進(jìn)化樹表明，擬南芥里ＡｔＣＰＫｓ劃分為四個(gè)亞組，從結(jié)果上看，相比其他三個(gè)亞??組，ＧｒｏｕｐＩＶ更靠近原生動(dòng)物這一分支（圖１．３）。??ＣＤＰＫｓ在植物中分布廣泛，在根、葉、花等不同組織中均有表達(dá)。ＣＤＰＫｓ??具有獨(dú)特的亞細(xì)胞分布，包括細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、質(zhì)膜、葉綠體、線粒體等。這使??它們能夠感知局部Ｃａ２＋濃度，并與它們的靶標(biāo)特異性地相互作川定位ＣＤＰＫｓ??在植物中的廣泛分布表明其具有激活不同底物的巨大潛力，并保多種倍號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途??徑中發(fā)揮重要作用。大多數(shù)ＣＤＰＫｓ的Ｎ端被預(yù)測(cè)冇肉豆蔻酰化位點(diǎn)，對(duì)丁？其、Ｉｋ：??細(xì)胞定位至關(guān)

擬南芥鈣依賴蛋白激酶（ＣＰＫｓ）的結(jié)構(gòu)與活力調(diào)控機(jī)制研宄?第一章引Ｈ??為５０％－９８％）。此外只有Ｎ端可變區(qū)域是最不保守的，序列長(zhǎng)短不一，且序列??相似性很低１７］。??Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ?ｒｅｇｉｏｎ?ＣａＭ－ＬＤ（ＣＬＤ）??ｙ?Ｉ?＼?Ｉ?＼??ｖａｒｉａｂｌｅ?ｄｏｍａｉｎ?Ｋｉｎａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ?—?Ｊｕｎｃｔｉｏｎ?－?ｅｆ?ＥＦ???ＥＦ?Ｅｆ??Ｎ－ＥＦ?ｌｏｂｅ?Ｃ－ＥＦ?ｌｏｂｅ??圖１．４ＣＤＰＫＳ的結(jié)構(gòu)域示意圖??１．４?ＣＤＰＫｓ蛋白在信號(hào)通路中的功能??植物在生長(zhǎng)發(fā)育過程中，應(yīng)對(duì)各種環(huán)境刺激，Ｃａ２＋是植物免疫和應(yīng)激反應(yīng)中??保守的第：信使和主要的調(diào)節(jié)因子。ＣＤＰＫｓ作為植物里一類重要的Ｃａ２＋感應(yīng)蛋??白，是許多信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)控因子，ＣＤＰＫｓ具有不同的表達(dá)模式、亞細(xì)胞定??位、ＣＶ＋敏感性和底物特異性，因此在復(fù)雜的免疫和應(yīng)激信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中起著多種Ｍ??要作州，其中包括對(duì)酶、通道蛋白和轉(zhuǎn)珙因子的激活與抑制等�？谇皩�(duì)擬南芥??ＣＰＫｓｆｒ：信號(hào)通路方面的研宂冇很多，卍氣孔運(yùn)動(dòng)、激素倍號(hào)傳導(dǎo)和袪因調(diào)控等??多方面有了新的進(jìn)展（圖１．５）。??Ｄｒｏｇｇｈｔ?Ａ＾Ａ?Ｓａｌｔ??ｐｍ?、？．?＜??ＣＰＫ３／６?ＣＰＫ４／Ｈ／１２?／■）＇?、?＼?ＣＰＫ２１??￡痛．ｆ?胸，－０?＼?＝忒??ＣＰＫ８＊?／?＼．?Ｔ?＼?ＣＰＫ２３??？?／，?＼?ＣＰＫ＾?■??／?ＣＰＫ４＾?５?＾??－￡ＰＫ１〇?／１〇ｍ?４?；?ＣＰＫ２１／２３??＿?一一一一＿－．＇??（?Ｖａｃｕｏｉ＊?Ｖ?？??、二一＾??Ｃａ：＊?ＣＰＫ


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