經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展造成了日益嚴(yán)重的環(huán)境污染問題,重金屬排放量逐年增加,重金屬污染已經(jīng)成為我國(guó)水環(huán)境污染的突出問題之一。銅作為水生生物必需的營(yíng)養(yǎng)元素之一,既是大自然廣泛存在的一種過渡金屬元素,也是生物體參與重要生命活動(dòng)的酶類的組成成分。隨著硫酸銅作為水產(chǎn)養(yǎng)殖藥物和飼料添加劑被大量使用,水體中銅的污染日益嚴(yán)重,研究表明溶解態(tài)的銅毒性最強(qiáng),毒性范圍廣闊,本文就溶解態(tài)的銅對(duì)水生動(dòng)物的胚胎發(fā)育毒性作用及其機(jī)制進(jìn)行了初步研究。選取技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)成熟的斑馬魚作為模式生物,采用急性暴露實(shí)驗(yàn)（96 h）研究Cu²⁺對(duì)斑馬魚胚胎的發(fā)育毒性作用。結(jié)果顯示:銅對(duì)斑馬魚胚胎有明顯的致死、致畸和抑制孵化效應(yīng),表現(xiàn)為發(fā)育遲緩,色素沉積緩慢,孵化延遲或者不孵化,其96 h的LC₅₀為4.122 mg/L。進(jìn)一步研究顯示:Cu²⁺低濃度下的即可抑制斑馬魚的胚胎發(fā)育,當(dāng)濃度高于0.20 mg/L可導(dǎo)致其孵化率為零。采用流式細(xì)胞術(shù)、Long-PCR、RT-PCR等方法對(duì)Cu²⁺所致斑馬魚胚胎的細(xì)胞凋亡、線粒體生物發(fā)生、基因表達(dá)量以及抗氧化酶活性進(jìn)... 

【文章來(lái)源】：煙臺(tái)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 重金屬的污染現(xiàn)狀
        1.1.1 重金屬銅污染及其毒害作用
        1.1.2 銅的體內(nèi)代謝調(diào)節(jié)
        1.1.3 銅與氧化應(yīng)激效應(yīng)關(guān)系
        1.1.4 銅與線粒體
    1.2 重金屬銅對(duì)魚類的毒性效應(yīng)
        1.2.1 重金屬銅對(duì)魚類的早期發(fā)育的影響
        1.2.2 重金屬銅對(duì)魚類生理生化作用的影響
    1.3 模式生物斑馬魚的毒理學(xué)研究
        1.3.1 斑馬魚的簡(jiǎn)介
        1.3.2 斑馬魚的研究概況
        1.3.3 斑馬魚的優(yōu)勢(shì)
    1.4 本研究的目的、內(nèi)容和意義
        1.4.1 研究目的與內(nèi)容
        1.4.2 研究意義
2 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育的急性毒性實(shí)驗(yàn)
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 儀器
        2.1.3 溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 成年斑馬魚的飼養(yǎng)
        2.2.2 斑馬魚胚胎的收集
        2.2.3 斑馬魚胚胎的選擇
        2.2.4胚胎染毒實(shí)驗(yàn)
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育進(jìn)程及形態(tài)的影響
        2.4.2 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎死亡率的影響
    2.5 討論
3 斑馬魚胚胎細(xì)胞ROS、線粒體質(zhì)量數(shù)及膜電勢(shì)的測(cè)定
    3.1 斑馬魚胚胎細(xì)胞總ROS的測(cè)定
        3.1.1 材料
        3.1.2 儀器
        3.1.3 溶液的配制
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 斑馬魚胚胎線粒體源ROS的測(cè)定
        3.2.1 溶液的配制
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 斑馬魚胚胎細(xì)胞線粒體質(zhì)量數(shù)的測(cè)定
        3.3.1 溶液的配制
        3.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.4 斑馬魚胚胎細(xì)胞線粒體膜電勢(shì)的測(cè)定
        3.4.1 溶液的配制
        3.4.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.6 結(jié)果
        3.6.1 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎細(xì)胞總ROS、線粒體源ROS的影響
        3.6.2 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎線粒體數(shù)的影響
        3.6.3 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎細(xì)胞線粒體膜電勢(shì)的影響
    3.7 討論
4 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎凋亡、mtDNA損傷、mRNA表達(dá)量的影響
    4.1 Annexin V-FITC法、AO法檢測(cè)斑馬魚胚胎細(xì)胞凋亡情況
        4.1.1 材料
        4.1.2 儀器
        4.1.3 溶液的配制
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 斑馬魚胚胎mt DNA損傷測(cè)定
        4.2.1 材料
        4.2.2 儀器
        4.2.3 溶液的配制
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 斑馬魚胚胎m RNA表達(dá)量的測(cè)定
        4.3.1 材料
        4.3.2 儀器
        4.3.3 溶液的配制
    4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.5 結(jié)果
        4.5.1 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎細(xì)胞凋亡的影響
        4.5.2 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎mt DNA損傷的影響
        4.5.3 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎m RNA表達(dá)量的影響
    4.6 討論
5 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎抗氧化酶活性影響的測(cè)定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 儀器
        5.1.3 溶液的配制
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響
        5.3.2 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎過氧化氫酶(CAT)活性的影響
        5.3.3 Cu~(2+)對(duì)斑馬魚胚胎丙二醛(MDA)活性的影響
    5.4 討論
6 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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