基于密碼子通用性及不同物種密碼子使用頻率差異原則,對(duì)家蠅乙酰膽堿酯酶的基因序列進(jìn)行優(yōu)化,旨在提高其在畢赤酵母中的表達(dá)量,增強(qiáng)其應(yīng)用前景。將基因序列中的低頻密碼子更換為畢赤酵母偏好的密碼子,同時(shí)調(diào)整乙酰膽堿酯酶各區(qū)段GC含量至45%～55%。將優(yōu)化的家蠅乙酰膽堿酯酶連接至表達(dá)載體pPIC9K并轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115中,搖瓶培養(yǎng)。以改進(jìn)的Ellman法測(cè)定重組家蠅乙酰膽堿酯酶（mdAchE）酶學(xué)性質(zhì),通過(guò)有機(jī)磷及氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥抑制試驗(yàn)分析重組酶mdAchE的生物活性。家蠅乙酰膽堿酯酶密碼子優(yōu)化后在畢赤酵母中實(shí)現(xiàn)高效表達(dá),酶活力約8.82 U/mL。抑制試驗(yàn)顯示,重組酶mdAchE能夠被馬拉硫磷等7種有機(jī)磷農(nóng)藥,克百威等8種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥抑制,最低抑制濃度IC₁₅值為1.83×10^-15μg/mL,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其它諸如氣相色譜法、生物傳感器等方法測(cè)得的最低檢測(cè)限(0.01μg/mL,4.14×10^-6μg/mL)。本試驗(yàn)結(jié)果表明,重組乙酰膽堿酯酶mdAchE在有機(jī)磷及氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)領(lǐng)域具有較大的應(yīng)用潛力。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2020,20(12)北大核心EICSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

重組乙酰膽堿酯酶md Ach E SDS-PAGE電泳分析

圖1 重組乙酰膽堿酯酶md Ach E SDS-PAGE電泳分析圖2a、圖2b顯示，重組酶md Ach E在20～80℃有活力，在50℃和65℃酶活力相當(dāng)，其最適反應(yīng)溫度為60℃。在50,60,70℃3個(gè)溫度處理下的前20 min其酶活力均下降得非常明顯，在50℃處理1 h,md Ach E酶活性損失了50%；在60℃處理1 h后，md Ach E相對(duì)酶活損失了60%;70℃處理1 h,md Ach E酶活性?xún)H剩38%。

【參考文獻(xiàn)】：
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