發(fā)布時(shí)間：2021-08-06 23:06

　　CD4、CD8分子是T淋巴細(xì)胞表面的抗原受體,屬于白細(xì)胞分化抗原,參與T細(xì)胞活化及抗原提呈。CD4、CD8分子分別于MHCII、MHCI型分子結(jié)合,保障T細(xì)胞與所結(jié)合靶細(xì)胞之間的聯(lián)系牢固,是動(dòng)物機(jī)體重要的免疫過(guò)程。通過(guò)對(duì)CD4與CD8分子的克隆及檢測(cè)可以觀測(cè)到動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞免疫水平。本次試驗(yàn)旨在完成延邊白鵝的CD4、CD8基因的克隆、生物信息學(xué)分析以及建立CD4、CD8基因的SYBR Green I熒光定量PCR方法。首先完成延邊白鵝CD4、CD8基因的克隆,為了得到兩對(duì)基因的克隆片段,此試驗(yàn)參照GenBank發(fā)表的JQ272858、JQ272859兩對(duì)基因組序列設(shè)計(jì)擴(kuò)增CD4、CD8基因兩對(duì)引物,分別在延邊白鵝血液中以及延邊白鵝七日齡小鵝的胸腺中分離T淋巴細(xì)胞并提取細(xì)胞內(nèi)mRNA,將所提取的mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,利用設(shè)計(jì)引物在cDNA內(nèi)克隆CD4、CD8基因,鑒定及測(cè)序正確后,對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行了初步生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示,此實(shí)驗(yàn)成功克隆得到了片段大小分別為1 443bp的延邊白鵝CD4分子以及片段大小為711bp的延邊白鵝CD8分子。蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示,延邊白鵝的CD4蛋白所... 

【文章來(lái)源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２延邊白鵝ＣＤ８基因擴(kuò)增結(jié)果??

１．延邊白鵝ＣＤ４、ＧＤ８基因的擴(kuò)增??通過(guò)延邊白鵝外周血所得ｃＤＮＡ在引物ＣＤ４－ＦＰ１和ＣＤ４－ＲＰ１進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)??增后，可見(jiàn)在１?４４３ｂｐ處有明顯特異性擴(kuò)增條帶，如圖１所示。??Ｍ?１??■Ｈ??Ｉ?Ｕ??圖１延邊白鵝ＣＤ４基因擴(kuò)增結(jié)果??Ｍ?鵝?ＣＤ４?基因的?ＰＣＲ?產(chǎn)物，１?ＤＬ２?０００?ＤＭＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．?２０００）??ＦＩＧ?１?ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤ４?ｇｅｎｅ?ｏｆ?Ｙａｎｂｉａｎ?ｗｈｉｔｅ??Ｍ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＣＤ４?ｇｏｏｓｅ，?１?ＤＬ２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．２０００）??通過(guò)延邊白鵝外周血所得ｃＤＮＡ在引物ＣＤ８－ＦＰ１和ＣＤＳ－ＲＰｌ進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)??増后，在７１１ｂｐ處有明顯特異性擴(kuò)增條帶�？梢�(jiàn)如圖２所示。??Ｍ?１??■■■??７１１?ｂｐ?—??ｍｍ??圖２延邊白鵝ＣＤ８基因擴(kuò)增結(jié)果??Ｍ?鵝?ＣＤ８?基因的?ＰＣＲ?產(chǎn)物，１?ＤＬ２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．?２０００）??ＦＩＧ?２?ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤ８?ｇｅｎｅ?ｏｆ?Ｙａｎｂｉａｎ?ｗｈｉｔｅ??Ｍ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＣＤ８?ｇｏｏｓｅ，?１?ＤＬ２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?（Ｔａｋａｒａ?ＤＬ．?２０００）??１５??

鏈基團(tuán)的進(jìn)一步卷曲、折疊以及次級(jí)鍵之間的相互作用下，延邊白鵝的ＣＤ４蛋??白所編碼的４８０個(gè)氨基酸，ａ螺旋與Ｐ折疊占ＣＤ４總蛋白的一半以上，形成了復(fù)雜??的髙級(jí)結(jié)構(gòu)，保證了?ＣＤ４蛋白的重要免疫作用。如圖７。??１７??


本文編號(hào)：3326654