應用于間充質干細胞體外擴增的無血清培養(yǎng)基的研究
發(fā)布時間：2021-08-06 19:57
間充質干細胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）由于其優(yōu)異的免疫調節(jié)及分化潛能,被公認為再生醫(yī)學領域最有前景的細胞之一。但是供體組織直接分離出的MSCs數(shù)量有限,而現(xiàn)有的MSCs擴增用含血清培養(yǎng)基無法應用于臨床,商業(yè)化無血清培養(yǎng)基又存在諸如對MSCs功能特性的維持能力較差等問題,導致MSCs相關的臨床應用面臨較大阻礙。究其原因,主要是對培養(yǎng)基中關鍵因子對細胞增殖及功能的影響及其相關機制的認識十分有限。而血清成分不明,商業(yè)化無血清培養(yǎng)基成分保密,因此無法基于這些培養(yǎng)基探究培養(yǎng)基組分對擴增的BMSCs生物學特性的影響,也無法精確調控細胞行為。針對上述問題,本文采用實驗方法設計適合大鼠骨髓來源MSCs（Bone marrow-derived MSCs,BMSCs）體外擴增并維持其功能特性的無血清培養(yǎng)基,進一步探究關鍵組分轉化生長因子（Transforming growth factor-β31,TGF-β31）對BMSCs增殖的影響及其分子機制。根據(jù)BMSCs的生物學特性和文獻調研選擇了19種無血清培養(yǎng)基的添加成分,采用Plackett-Burman設計方法,以細胞增殖...
【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：76 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１．１?ＭＳＣｓ的來源及特性＿??Ｆｉｇ?１．１?ＭＳＣｓ?ｓｏｕｒｃｅｓ?ａｎｄ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ??
２．３．２．１?０Ｍ中ＢＭＳＣｓ的形態(tài)觀察和增殖檢測??將Ｐ４代或Ｐ５代ＢＭＳＣｓ以ｌｘｌ〇４?ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２的密度接種至上述各組培養(yǎng)基后，培養(yǎng)??至第６天觀察細胞形態(tài)。由圖２．４?（ａ）可知，對照組含血清培養(yǎng)基ＳＣＭ和商業(yè)化無血??清培養(yǎng)基Ｌｚ中細胞呈細長的梭狀，魚群狀分布，細胞匯合率達到９０％以上。實驗組中，??Ｏｐｔ－１、Ｏｐｔ－７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８無血清培養(yǎng)基中ＢＭＳＣｓ能夠進行貼壁生長，細??胞呈梭狀，密度較其他５組更高，與圖２．１中的對應初篩培養(yǎng)基相比，細胞數(shù)量和形態(tài)??均得到改善，但仍差于ＳＣＭ組和Ｌｚ組。其他５組中細胞數(shù)量較少，其中，Ｏｐｔ－９、Ｏｐｔ－??１３和Ｏｐｔ－２０中細胞成簇生長，Ｏｐｔ－２１和Ｏｐｔ－２２中雖有部分細胞貼壁，但細胞數(shù)量較??少。圖２．４（ｂ）為Ｐ５代ＢＭＳＣｓ在ＯＭ各培養(yǎng)基中培養(yǎng)至第６天的形態(tài)，和Ｐ４代ＢＭＳＣｓ??相比，無明顯差別。??
圖２．４?ＯＭ中ＢＭＳＣｓ的形態(tài)??Ｆｉｇ．２．４?ＢＭＳＣｓ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ＯＭ??用ＣＣＫ－８試劑盒測定ＢＭＳＣｓ在各組培養(yǎng)基中的增殖情況。如圖２．５所示，Ｌｚ組和??ＳＣＭ組細胞增殖基本相當。和初篩無血清培養(yǎng)基實驗組（見圖２．２）相比，０？１－１、０卩１－??７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８實驗組在第６天獲得的細胞數(shù)有明顯提升。??ａ??３．０－｜??２－５－?｜??ｌｌｉｌｉｉ??ｂ?＃?〇今?〇／?〇／?ｃ／?〇／?ｃ／?ｃ／?Ｖ?＃??Ａ?Ｍｅｄｉｕｍ??茗?１２０－??＾１００－?ｎ??１?８０－?ｉ??２?６〇ｉ｜｜｜｜ｉ｜ｆｌ｜ｎ?ａｌｌｌ?Ｉ?ｍ?ｈ??１?－；ＰＰ??Ｍｅｄｉｕｍ??□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｂａｔｃｈ?□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄ?ｂａｔｃｈ?■?Ｐ４－ｔｈｅ?ｔｈｉｒｄ?ｂ
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Vero細胞無血清培養(yǎng)基的優(yōu)化[J]. 段盼盼,楊帆,耿興良,龍云鳳,郭琦,龍藝,王明清,廖國陽,李衛(wèi)東. 中國生物制品學雜志. 2015(05)
[2]Vero細胞無血清培養(yǎng)基的研究進展[J]. 張香玲,李薇. 微生物學免疫學進展. 2015(02)
[3]Stem cells, a two-edged sword: Risks and potentials of regenerative medicine[J]. Anna Chiara Piscaglia. World Journal of Gastroenterology. 2008(27)
[4]動物細胞無血清培養(yǎng)基的研究與設計方法[J]. 王永民,陳昭烈. 中國生物工程雜志. 2007(01)
[5]間充質干細胞在神經系統(tǒng)中的應用[J]. 楊志剛,吳曉牧. 實用臨床醫(yī)學. 2005(08)
本文編號：3326392
【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：76 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１．１?ＭＳＣｓ的來源及特性＿??Ｆｉｇ?１．１?ＭＳＣｓ?ｓｏｕｒｃｅｓ?ａｎｄ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ??
２．３．２．１?０Ｍ中ＢＭＳＣｓ的形態(tài)觀察和增殖檢測??將Ｐ４代或Ｐ５代ＢＭＳＣｓ以ｌｘｌ〇４?ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２的密度接種至上述各組培養(yǎng)基后，培養(yǎng)??至第６天觀察細胞形態(tài)。由圖２．４?（ａ）可知，對照組含血清培養(yǎng)基ＳＣＭ和商業(yè)化無血??清培養(yǎng)基Ｌｚ中細胞呈細長的梭狀，魚群狀分布，細胞匯合率達到９０％以上。實驗組中，??Ｏｐｔ－１、Ｏｐｔ－７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８無血清培養(yǎng)基中ＢＭＳＣｓ能夠進行貼壁生長，細??胞呈梭狀，密度較其他５組更高，與圖２．１中的對應初篩培養(yǎng)基相比，細胞數(shù)量和形態(tài)??均得到改善，但仍差于ＳＣＭ組和Ｌｚ組。其他５組中細胞數(shù)量較少，其中，Ｏｐｔ－９、Ｏｐｔ－??１３和Ｏｐｔ－２０中細胞成簇生長，Ｏｐｔ－２１和Ｏｐｔ－２２中雖有部分細胞貼壁，但細胞數(shù)量較??少。圖２．４（ｂ）為Ｐ５代ＢＭＳＣｓ在ＯＭ各培養(yǎng)基中培養(yǎng)至第６天的形態(tài)，和Ｐ４代ＢＭＳＣｓ??相比，無明顯差別。??
圖２．４?ＯＭ中ＢＭＳＣｓ的形態(tài)??Ｆｉｇ．２．４?ＢＭＳＣｓ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ＯＭ??用ＣＣＫ－８試劑盒測定ＢＭＳＣｓ在各組培養(yǎng)基中的增殖情況。如圖２．５所示，Ｌｚ組和??ＳＣＭ組細胞增殖基本相當。和初篩無血清培養(yǎng)基實驗組（見圖２．２）相比，０？１－１、０卩１－??７、Ｏｐｔ－８、Ｏｐｔ－１５、Ｏｐｔ－１８實驗組在第６天獲得的細胞數(shù)有明顯提升。??ａ??３．０－｜??２－５－?｜??ｌｌｉｌｉｉ??ｂ?＃?〇今?〇／?〇／?ｃ／?〇／?ｃ／?ｃ／?Ｖ?＃??Ａ?Ｍｅｄｉｕｍ??茗?１２０－??＾１００－?ｎ??１?８０－?ｉ??２?６〇ｉ｜｜｜｜ｉ｜ｆｌ｜ｎ?ａｌｌｌ?Ｉ?ｍ?ｈ??１?－；ＰＰ??Ｍｅｄｉｕｍ??□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｂａｔｃｈ?□?Ｐ４－ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄ?ｂａｔｃｈ?■?Ｐ４－ｔｈｅ?ｔｈｉｒｄ?ｂ
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Vero細胞無血清培養(yǎng)基的優(yōu)化[J]. 段盼盼,楊帆,耿興良,龍云鳳,郭琦,龍藝,王明清,廖國陽,李衛(wèi)東. 中國生物制品學雜志. 2015(05)
[2]Vero細胞無血清培養(yǎng)基的研究進展[J]. 張香玲,李薇. 微生物學免疫學進展. 2015(02)
[3]Stem cells, a two-edged sword: Risks and potentials of regenerative medicine[J]. Anna Chiara Piscaglia. World Journal of Gastroenterology. 2008(27)
[4]動物細胞無血清培養(yǎng)基的研究與設計方法[J]. 王永民,陳昭烈. 中國生物工程雜志. 2007(01)
[5]間充質干細胞在神經系統(tǒng)中的應用[J]. 楊志剛,吳曉牧. 實用臨床醫(yī)學. 2005(08)
本文編號：3326392
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