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CD133譜系示蹤小鼠第四腦室單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及可變剪接分析

發(fā)布時(shí)間:2021-07-30 16:04
  大腦細(xì)胞類型的復(fù)雜性眾所周知,只有對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織中各種成分和細(xì)胞類型的相互作用進(jìn)行徹底了解,才能更好地理解中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理功能與病理狀態(tài)。現(xiàn)有的細(xì)胞分類方式在標(biāo)記的選擇上限制了細(xì)胞類型的分辨率,難以體現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的異質(zhì)性。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)通過(guò)無(wú)偏見(jiàn)的獲取單細(xì)胞使得組織異質(zhì)性得到最大程度的體現(xiàn)。神經(jīng)干細(xì)胞具有分化為多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞類型的能力。過(guò)去十年中,關(guān)于成年神經(jīng)發(fā)生的研究主要集中在兩個(gè)大腦區(qū)域,即側(cè)腦室的腦室下區(qū)(SVZ)和海馬結(jié)構(gòu)的顆粒下區(qū)(SGZ)。而鮮少有關(guān)于第四腦室的相關(guān)研究報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)室前期的工作中發(fā)現(xiàn)第四腦室存在可以被VEGF細(xì)胞因子激活的靜息態(tài)神經(jīng)干細(xì)胞。同時(shí)現(xiàn)有研究結(jié)果表明可變剪接在神經(jīng)元發(fā)育和成熟神經(jīng)元的功能中均起到關(guān)鍵作用。本課題構(gòu)建了 CD133譜系示蹤小鼠,并對(duì)其第四腦室細(xì)胞進(jìn)行Smart-seq2單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。共捕獲96個(gè)ZSGreen 陽(yáng)性單細(xì)胞,通過(guò)對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行無(wú)監(jiān)督聚類分析發(fā)現(xiàn)第四腦室CD133+干細(xì)胞可在生理?xiàng)l件下分化為神經(jīng)元、室管膜細(xì)胞、成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞等多個(gè)細(xì)胞類型,... 

【文章來(lái)源】:南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】:76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

CD133譜系示蹤小鼠第四腦室單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及可變剪接分析


圖1.1成年神經(jīng)發(fā)生與膠質(zhì)發(fā)生過(guò)程??Fig.?1.1?Adult?Neurogenesis?and?Gliogenesis??

示意圖,膠質(zhì),細(xì)胞,示意圖


?第1章引言???成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞同樣遍布整個(gè)中樞神經(jīng)系統(tǒng),圍繞神經(jīng)元軸突產(chǎn)生髓??磷脂,從而使軸突傳導(dǎo)速度最大化[27]。髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞是在胚胎發(fā)生過(guò)程和產(chǎn)??后早期階段由少突膠質(zhì)祖細(xì)胞(OPC)衍生而來(lái)的[28]。髓鞘實(shí)際上是少突膠質(zhì)細(xì)??胞膜的延伸,屬于高度復(fù)雜的結(jié)構(gòu)。成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在未分化的OPC,這??使得整個(gè)成年期均可產(chǎn)生髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞[27]。有研究表明,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)受??到損傷后,OPCs向髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和分化增加,并且對(duì)于此類病理的??恢復(fù)階段有突出貢獻(xiàn)[27]。此外,最近的證據(jù)表明,少突膠質(zhì)細(xì)胞還可能具有免疫??相關(guān)功能[29],通過(guò)與神經(jīng)元[29]的直接連接起調(diào)控作用,同時(shí)存在與脈管系統(tǒng)[30]??的相互作用。因此,少突膠質(zhì)細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)可能對(duì)健康和疾病產(chǎn)生廣泛的影響。??小膠質(zhì)細(xì)胞??'?Oligodendrocyt*??少突膠質(zhì)細(xì)胞??圖1.2各類膠質(zhì)細(xì)胞示意圖??Fig.?1.2?Schematic?Diagram?of?Various?Glial?Cells??1.3?CD133?簡(jiǎn)介??1.3.1?CD133?結(jié)構(gòu)??CD133又名Prominin-1,共27個(gè)外顯子,分子量為120?kDa,是人類發(fā)現(xiàn)??4??

模式圖,模式,位點(diǎn),序列


ic?recombinase,T-SSRS)之一,??包括翻轉(zhuǎn)酶(flipase,FLP)和?D6?特異性重組酶(D6recombinase,DRE)?[43,44]。??人們發(fā)現(xiàn)它是由噬菌體P1的Cre?(環(huán)化重組酶)基因產(chǎn)生的38?kDa的DNA重??組酶[45’46]。它可以特異性識(shí)別loxP位點(diǎn)的DNA序列,之后介導(dǎo)兩個(gè)丨0XP位點(diǎn)??之間序列的位點(diǎn)特異性缺失[46'47]。loxP位點(diǎn)共長(zhǎng)34?bp,包含兩個(gè)長(zhǎng)為13?bp的??反向回文重復(fù)序列和一個(gè)長(zhǎng)為8?bp的核心序列(如圖1.4)。Cre-loxP系統(tǒng)對(duì)基??因定向沉默的機(jī)制為:Cre酶特異識(shí)別兩個(gè)loxp位點(diǎn),之后將兩個(gè)l〇xp之間的??片段與一個(gè)loxp序列進(jìn)行剪切,并形成一個(gè)環(huán)脫下。當(dāng)構(gòu)建該系統(tǒng)介導(dǎo)的定向??基因敲除小鼠時(shí),需要同時(shí)在目標(biāo)小鼠基因組中同時(shí)插入兩段序列[48.49]。首先,??Cre重組酶應(yīng)由特異靶向目標(biāo)細(xì)胞或組織的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄,其次,在需要敲除??的基因兩段插入Loxp序列。重組發(fā)生時(shí)間由啟動(dòng)子控制。??Cre-/oxP?system?Conditional?mutation;????General?breeding??Cre?recombinase?(38?kDa)?Ti**u^*p^ific?Crt-dnvtr?01??toxP??equefX3e?(34?bp)??5?-ATAACTTCOTATAMHNTANNNTATACOAAGTTAT?3??—1>—??Inadrymod?/'?Ir?tntu*?X??V?V??y??圖1.4?Cre-LoxP系統(tǒng)剪接模式??Fig.?1.4?splicing?mod

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]PacBio Sequencing and Its Applications[J]. Anthony Rhoads,Kin Fai Au.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(05)



本文編號(hào):3311705

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