蛋白定量是生化研究中最基本的測量,在臨床檢測與診斷、食品安全、藥性分析等領(lǐng)域具有重要意義�；陔妵婌F中產(chǎn)生的液滴誘導(dǎo)聚集效應(yīng),我們介紹一種高分辨率和高靈敏度的測定蛋白質(zhì)濃度的絕對定量方法。電噴霧-差分電遷移率-粒子計(jì)數(shù)分析技術(shù)（Electrospray-Differential Mobility Analysis-Condensation Particle Counter,ES-DMA-CPC）是根據(jù)不同大小的帶電顆粒在電場中遷移率不同,并對獲得不同粒徑尺寸分布的顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)。其具有無需樣品預(yù)處理、靈敏度高、耗時(shí)短、耗樣量少、檢測范圍廣等優(yōu)勢。本課題研究內(nèi)容包括ES-DMA-CPC方法的建立、ES-DMA-CPC儀器裝置搭建、ES-DMA-CPC實(shí)驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化和ES-DMA-CPC絕對定量方法的應(yīng)用四個(gè)部分。該方法的建立和應(yīng)用不僅滿足市場對蛋白質(zhì)定量表征新技術(shù)的需求,而且作為潛在基準(zhǔn)方法的研究具有重要的計(jì)量意義。本課題具體內(nèi)容如下:（1）ES-DMA-CPC方法的建立:電噴霧過程中液滴溶劑蒸發(fā)后,會引起顆粒的聚集,這種現(xiàn)象我們稱之為液滴誘導(dǎo)聚集效應(yīng)。我們可以通過數(shù)學(xué)概率統(tǒng)計(jì)分析來描述檢測... 

【文章來源】：北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２＿１電噴霧示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ??９??

氣和Ｃ０２混合的液滴，產(chǎn)生鞘流，該鞘流將液滴輸送到電噴霧室，??高電荷的液滴被Ｘ－ｒａｙ電離器中和。最終，產(chǎn)生霧化的高電荷液滴蒸發(fā)干燥后，根據(jù)??電荷殘余機(jī)制，剩下的帶電顆粒即待分析樣品進(jìn)入差分電遷移率儀（ＤＭＡ）。??２．?２．?２差分電遷移率分析儀（ＤＭＡ）??差分遷移率分析儀（ＤＭＡ），是帶電顆粒遷移率選擇和遷移率分布測量的重要工??具。ＤＭＡ的前身是在１９５７年開發(fā)的，用于研宄小顆粒的充電，并在２０世紀(jì)７０年代??進(jìn)一步作為單分散顆粒的來源進(jìn)行了改進(jìn)［５２］。ＤＭＡ的示意圖如圖２－２所示。ＤＭＡ內(nèi)??部的電場會影響帶電粒子的流動(dòng)軌跡。ＤＭＡ由兩個(gè)同軸的幾何結(jié)構(gòu)構(gòu)成，ＤＭＡ包含??一個(gè)內(nèi)部圓柱體，該內(nèi)部圓柱體連接到負(fù)極電源，外筒接地，ＤＭＡ內(nèi)部產(chǎn)生精確的??軸向均勻電常帶電的氣溶膠顆粒通過靠近外柱的入口進(jìn)入ＤＭＡ，鞘流從頂部進(jìn)入。??在電場作用下，只有帶正電的顆粒遷移穿過內(nèi)部圓柱體和外筒之間的空間，通過調(diào)節(jié)??ＤＭＡ電壓選擇電遷移率和相應(yīng)的顆粒尺寸。最終在位于下游的端口收集對應(yīng)電壓選??擇的窄電遷移率范圍內(nèi)的單分散顆粒�？傊�，ＤＭＡ是基于移動(dòng)性的顆粒選擇，顆粒??進(jìn)入ＤＭＡ，并根據(jù)其電遷移率進(jìn)行分離。??Ｓｈｅａｔｈ?Ａｉｉ－??ｒ——十�。�??ｆ?和〒?｜?Ｉ??Ｕ?Ｈｉｇｈ?Ｖｏｌｔａｇｅ??一ｎ＿＿ｒｉ￣￣＾?〕?ｉ??Ｃｈａｉｇｅｄ?ｐａｒｔｉｃｌｅ?：?Ｉ??！?Ｒｉ??ｉ?ｉ??；?Ｉ??｜?Ｌ?！?Ｒ２?，?Ｉ??ｉ牛?＿?ｉ??；?ｌ??；?Ｉ??：?Ｉ??：?Ｉ??｜??ｉ??ｊ?Ｉ??＼?Ｉ??！??：?——？?Ｅｘｈａｕｓｔ?ｆ

?第二章電噴霧－差分電遷移率－粒子計(jì)數(shù)法???２．?２．?３冷凝顆粒計(jì)數(shù)器（ＣＰＣ）??顆粒計(jì)數(shù)器對ＤＭＡ選擇分離的顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)，獲取粒徑分布。ＣＰＣ的示意圖如??圖２－３所示。冷凝顆粒計(jì)數(shù)器（ＣＰＣ）是目前最靈敏的檢測器，本課題所采用的是水??冷凝顆粒計(jì)數(shù)器（ＷＣＰＣ，型號３７８８，?ＴＳＩ），其響應(yīng)時(shí)間小于０．１?ｓ。由于直徑小于??０．２?ｐｍ的顆粒不能通過光學(xué)技術(shù)直接檢測，而我們所檢測的生物納米顆粒直徑太小，??因此我們采用冷凝顆粒計(jì)數(shù)法。ＣＰＣ的高靈敏度是基于顆粒因凝結(jié)而變大從而被檢測??計(jì)數(shù)。在該儀器中，樣本顆粒通過內(nèi)部栗從進(jìn)氣口進(jìn)入ＣＰＣ。鞘流集中顆粒，以允許??檢測較小的粒子，并保護(hù)光學(xué)器件免受污染。首先氣溶膠顆粒進(jìn)入充滿水蒸氣的溫度??平衡區(qū)域，然后，顆粒進(jìn)入加熱生長區(qū)，顆粒凝結(jié)并形成微米級別大小的液滴。液滴??通過光檢測器并被計(jì)數(shù)。ＣＰＣ對單個(gè)顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)，并進(jìn)行連續(xù)實(shí)時(shí)重合校正，最高??可達(dá)４０００００顆粒／ｃｍ３。通過更改鞘流或工作溫度可以降低檢測的顆粒尺寸大小下限??至約?１?ｎｍ［５３］。??Ｏｐｔｉｃａｌ?ｄｅｔｅｃｔｏｒ?（ａｔ??９０°Ｃ）?ａｎｄ?ｃｏｕｎｔｅｒ??Ｗｏｒｋｉｎｇ?ｆｌｕｉｄ?Ｉ??Ｍｏｂｉｌｉｔｙ?ｓｉｚｅ?一１?＾??ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｐａｒｔｉｃｌｅｓ???????費(fèi)承?Ｏ?０霤Ｏ鷂??ｆｒｏｕｉ?ＤＭＡ?＿＿＿?咖？??？??Ｌａｓｅｒ?ｌｉｇｈｔ??圖２－３冷凝顆粒計(jì)數(shù)器示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＣＰＣ??對于待分析物進(jìn)入ＥＳ－ＤＭＡ－ＣＰＣ系統(tǒng)后，通常溶解在揮發(fā)性緩沖溶液中的分析??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3300101