目的研究在人表皮細(xì)胞中hsa-let-7b-5p的作用和其對ΔNp63表達變化的影響,探討hsa-let-7b-5p如何影響人表皮細(xì)胞的生物功能。方法人角質(zhì)形成細(xì)胞株（HaCaT）分別轉(zhuǎn)染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibitor和hsa-let-7b-5p inhibitor NC,通過CCK8檢測細(xì)胞增殖,Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲,利用miRcode網(wǎng)站和RNAhybrid網(wǎng)站預(yù)測p63和hsa-let-7b-5p結(jié)合,利用實時熒光定量PCR檢測hsa-let-7b-5p及p63表達情況。結(jié)果 hsalet-7b-5p的高表達對HaCaT細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲均有抑制作用,hsa-let-7b-5p表達的抑制則促進了HaCaT細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。通過網(wǎng)站預(yù)測發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p可與對皮膚表皮細(xì)胞有重要作用的p63結(jié)合;實時定量PCR分析發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p影響p63的表達。結(jié)論 hsa-let-7b-5p可能通過靶向p63 mRNA水平而在人表皮細(xì)胞... 

【文章來源】：中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2020,29(04)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

hsa-let-7b-5p在Ha Ca T細(xì)胞中表達的實時熒光定量PCR檢測

本研究首先通過熒光定量PCR技術(shù)檢測到在正常人角質(zhì)形成細(xì)胞中hsa-let-7b-5p可以穩(wěn)定表達，然后對正常人角質(zhì)形成細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染處理使各細(xì)胞分組中hsa-let-7b-5p的表達出現(xiàn)差異，進一步通過CCK8實驗檢測hsa-let-7b-5p的差異表達對細(xì)胞增殖所產(chǎn)生的影響，發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p對細(xì)胞增殖有抑制作用，通過Transwell實驗發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p對細(xì)胞遷移和侵襲同樣有抑制效果，這與之前文獻報道過的p63表達缺失對表皮細(xì)胞的作用一致[8]。有研究表明，p63在表皮的增殖分化過程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[8]。于是我們利用生信分析網(wǎng)站對hsa-let-7b-5p和p63的結(jié)合可能性進行了預(yù)測。通過生信分析網(wǎng)站預(yù)測發(fā)現(xiàn)ΔNp63的3’-UTR與hsa-let-7b-5p有1個結(jié)合位點，進一步經(jīng)過熒光定量PCR實驗驗證hsa-let-7b-5p可以抑制p63及其存在于皮膚中的主要亞型ΔNp63的表達，證實了網(wǎng)站預(yù)測的結(jié)果。mi RNA Let-7家族成員Let-7a表達的抑制影響表皮生長因子受體EGFR的表達[9]，而EGFR信號通路又參與很多腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移過程的調(diào)控，所以Let-7有可能成為抑制上皮腫瘤發(fā)生發(fā)展的靶點之一。在哺乳動物中廣泛表達的Let-7b參與皮膚黑色素瘤細(xì)胞周期的調(diào)控，干擾細(xì)胞周期的進展促進的癌癥的發(fā)生[10]。另外有研究證明Let-7b在多種上皮腫瘤中發(fā)揮作用，Let-7b-5p參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病[11]，而let-7b-3p又可以做為結(jié)腸癌的早期檢測指標(biāo)之一[12]，并且let-7b還可以通過抑制CYP2J2的翻譯來減少細(xì)胞增殖并促進腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。這都說明let-7b與上皮組織的增殖分化有密切關(guān)系，但其對皮膚表皮細(xì)胞的功能影響卻鮮有報道。

分別將hsa-let-7b-5p模擬物及抑制劑轉(zhuǎn)染到Ha Ca T細(xì)胞中，培育48h后采用CCK8法檢測不同組中細(xì)胞增殖水平，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染hsa-let-7b-5p抑制劑的Ha Ca T細(xì)胞，其增殖水平顯著增強，而轉(zhuǎn)染hsa-let-7b-5p模擬物的Ha Ca T細(xì)胞，其增殖水平顯著降低（圖2），表明hsa-let-7b-5p對細(xì)胞的增殖有抑制作用。3 hsa-let-7b-5p抑制Ha Ca T細(xì)胞的遷移和侵襲

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR-let-7b通過調(diào)控相關(guān)細(xì)胞周期蛋白影響皮膚黑色素瘤的增殖和凋亡[J]. 秦琴,寧花蘭,陳小燕,陳少英,張艷珍,陳大江.  中國美容醫(yī)學(xué). 2018(07)
[2]宮頸癌細(xì)胞中ΔNp63α的MicroRNA表達譜及其對hsa-let-7b-3p的調(diào)控機制[J]. 宋偉國,錢莉莉,吳大保,申震,朱靖,程勇,肖衛(wèi)華,周穎.  腫瘤防治研究. 2018(03)
[3]Hsa-let-7誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡與G0/G1期阻滯及其分子機制[J]. 魏輝,侯俊明,董明,杜寧,任宏.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2013(11)

博士論文
[1]miR-31在皮膚損傷修復(fù)過程中介導(dǎo)炎癥階段向上皮再生階段轉(zhuǎn)換的功能與作用機制[D]. 石建云.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018

碩士論文
[1]CircRNA102411通過let-7b-5p調(diào)節(jié)CCR7表達促進頭頸鱗癌侵襲遷移的研究[D]. 王文龍.中國醫(yī)科大學(xué) 2018



本文編號：3260925