目的研究在人表皮細(xì)胞中hsa-let-7b-5p的作用和其對(duì)ΔNp63表達(dá)變化的影響,探討hsa-let-7b-5p如何影響人表皮細(xì)胞的生物功能。方法人角質(zhì)形成細(xì)胞株（HaCaT）分別轉(zhuǎn)染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibitor和hsa-let-7b-5p inhibitor NC,通過(guò)CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲,利用miRcode網(wǎng)站和RNAhybrid網(wǎng)站預(yù)測(cè)p63和hsa-let-7b-5p結(jié)合,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)hsa-let-7b-5p及p63表達(dá)情況。結(jié)果 hsalet-7b-5p的高表達(dá)對(duì)HaCaT細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲均有抑制作用,hsa-let-7b-5p表達(dá)的抑制則促進(jìn)了HaCaT細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。通過(guò)網(wǎng)站預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p可與對(duì)皮膚表皮細(xì)胞有重要作用的p63結(jié)合;實(shí)時(shí)定量PCR分析發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p影響p63的表達(dá)。結(jié)論 hsa-let-7b-5p可能通過(guò)靶向p63 mRNA水平而在人表皮細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2020,29(04)CSCD

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【部分圖文】：

hsa-let-7b-5p在Ha Ca T細(xì)胞中表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

本研究首先通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)到在正常人角質(zhì)形成細(xì)胞中hsa-let-7b-5p可以穩(wěn)定表達(dá)，然后對(duì)正常人角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理使各細(xì)胞分組中hsa-let-7b-5p的表達(dá)出現(xiàn)差異，進(jìn)一步通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)hsa-let-7b-5p的差異表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖所產(chǎn)生的影響，發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p對(duì)細(xì)胞增殖有抑制作用，通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)hsa-let-7b-5p對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲同樣有抑制效果，這與之前文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)的p63表達(dá)缺失對(duì)表皮細(xì)胞的作用一致[8]。有研究表明，p63在表皮的增殖分化過(guò)程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[8]。于是我們利用生信分析網(wǎng)站對(duì)hsa-let-7b-5p和p63的結(jié)合可能性進(jìn)行了預(yù)測(cè)。通過(guò)生信分析網(wǎng)站預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)ΔNp63的3’-UTR與hsa-let-7b-5p有1個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，進(jìn)一步經(jīng)過(guò)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證hsa-let-7b-5p可以抑制p63及其存在于皮膚中的主要亞型ΔNp63的表達(dá)，證實(shí)了網(wǎng)站預(yù)測(cè)的結(jié)果。mi RNA Let-7家族成員Let-7a表達(dá)的抑制影響表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR的表達(dá)[9]，而EGFR信號(hào)通路又參與很多腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移過(guò)程的調(diào)控，所以Let-7有可能成為抑制上皮腫瘤發(fā)生發(fā)展的靶點(diǎn)之一。在哺乳動(dòng)物中廣泛表達(dá)的Let-7b參與皮膚黑色素瘤細(xì)胞周期的調(diào)控，干擾細(xì)胞周期的進(jìn)展促進(jìn)的癌癥的發(fā)生[10]。另外有研究證明Let-7b在多種上皮腫瘤中發(fā)揮作用，Let-7b-5p參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病[11]，而let-7b-3p又可以做為結(jié)腸癌的早期檢測(cè)指標(biāo)之一[12]，并且let-7b還可以通過(guò)抑制CYP2J2的翻譯來(lái)減少細(xì)胞增殖并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。這都說(shuō)明let-7b與上皮組織的增殖分化有密切關(guān)系，但其對(duì)皮膚表皮細(xì)胞的功能影響卻鮮有報(bào)道。

分別將hsa-let-7b-5p模擬物及抑制劑轉(zhuǎn)染到Ha Ca T細(xì)胞中，培育48h后采用CCK8法檢測(cè)不同組中細(xì)胞增殖水平，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染hsa-let-7b-5p抑制劑的Ha Ca T細(xì)胞，其增殖水平顯著增強(qiáng)，而轉(zhuǎn)染hsa-let-7b-5p模擬物的Ha Ca T細(xì)胞，其增殖水平顯著降低（圖2），表明hsa-let-7b-5p對(duì)細(xì)胞的增殖有抑制作用。3 hsa-let-7b-5p抑制Ha Ca T細(xì)胞的遷移和侵襲

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
[1]CircRNA102411通過(guò)let-7b-5p調(diào)節(jié)CCR7表達(dá)促進(jìn)頭頸鱗癌侵襲遷移的研究[D]. 王文龍.中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3260925