為了分析ERBS與其目標(biāo)寡核苷酸的相互作用,研究設(shè)計合成了對應(yīng)目標(biāo)寡核苷酸的ERBS基因,并進(jìn)行了蛋白的原核表達(dá)、純化以及其與目標(biāo)寡核苷酸的相互作用分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),ERBS在Escherichia coli BL21（DE3）中表達(dá)時呈現(xiàn)包涵體狀態(tài),而改變宿主細(xì)胞為Escherichia coli Rosetta（DE3）,可極大提高其可溶性表達(dá)水平;純化的ERBS與FAM標(biāo)記的寡核苷酸互作分析發(fā)現(xiàn),其解離常數(shù)為（9.76±0.62）nmol/L。試驗(yàn)結(jié)果可為深入研究不同ERBS與其目標(biāo)寡核苷酸的相互作用奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(02)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 構(gòu)建載體所需引物
    1.3 合成寡核苷酸鏈
    1.4 方法
        1.4.1 pET-24a-ERBS表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.4.2 BL21(DE3）中ERBS蛋白的表達(dá)
        1.4.3 Rosetta(DE3）中ERBS蛋白的表達(dá)
        1.4.4 光譜分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 ERBS的基因序列（5'-3'）及其對應(yīng)的氨基酸序列
    2.2 ERBS片段的獲得
    2.3 蛋白純化結(jié)果
        2.3.1 BL21(DE3）中ERBS蛋白的表達(dá)結(jié)果
        2.3.2 Rosetta(DE3）中ERBS蛋白的表達(dá)結(jié)果
    2.4 ERBS蛋白與寡核苷酸鏈的相互作用
3 結(jié)論與討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物microRNA靶基因的預(yù)測與驗(yàn)證技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 崔俊霞,魏康寧,謝伊源,王麗,李用芳.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(07)
[2]PUF蛋白的研究進(jìn)展[J]. 張靜,王文珍,蒲首丞,孫梅好.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(05)
[3]豬瘟病毒E2蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)及免疫原性分析[J]. 王冬雨,魏薔,劉運(yùn)超,劉暢,楊棋,崔穎磊,張改平.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(03)
[4]狂犬病病毒G蛋白的原核表達(dá)及反應(yīng)原性分析[J]. 王攀,劉運(yùn)超,魏薔,柴書軍,陳玉梅,張改平.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(04)
[5]包涵體重組蛋白的純化及復(fù)性[J]. 紀(jì)劍飛,張成剛.  沈陽藥科大學(xué)學(xué)報. 1998(04)



本文編號：3254988