腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白（ATP-Binding Cassette Transporter）,簡稱ABC轉(zhuǎn)運蛋白（ABC transporter）,是一類跨膜蛋白。ABC轉(zhuǎn)運體含有一個共同的核心結(jié)構(gòu)—2個核苷酸結(jié)合區(qū)域（nucleotide binding domains,NBDs）和2個跨膜區(qū)域（transmembrane domains,TMDs）其中NBDs結(jié)構(gòu)相對保守,根據(jù)NBDs的保守結(jié)構(gòu),把家蠶ABC轉(zhuǎn)運蛋白分為8個亞家族:ABCA、ABCB、ABCC、ABCD、ABCE、ABCF、ABCG、ABCH。其中ABCD亞家族的成員都是半轉(zhuǎn)運蛋白,但目前對ABCD的研究報道較少,尤其家蠶ABCD₂基因的功能更不清楚。我們以家蠶抗BmNPV品種白玉N（BYN）和常規(guī)品種白玉（BY）經(jīng)BmNPV侵染后的脂肪體組織為材料進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析時發(fā)現(xiàn)有兩個差異基因?qū)儆贏BC轉(zhuǎn)運蛋白通路,其中一個為ABCD₂基因,為進(jìn)一步清楚ABCD₂的序列信息和相關(guān)功能,本研究以家蠶品系白玉N和白玉為材料,利用RACE技術(shù)克隆了兩個品系A(chǔ)BC... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 ABC轉(zhuǎn)運蛋白簡介
        1.1.2 ABC轉(zhuǎn)運蛋白的分子結(jié)構(gòu)和作用機制
    1.2 ABC轉(zhuǎn)運家族的研究概況
    1.3 ABCD亞族的研究進(jìn)展
    1.4 家蠶抗BmNPV的研究概況
        1.4.1 家蠶抗BmNPV資源的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 家蠶抗BmNPV的遺傳規(guī)律研究
        1.4.3 已經(jīng)分離和鑒定的抗BmNPV物質(zhì)
        1.4.4 組學(xué)技術(shù)在家蠶抗BmNPV的應(yīng)用
    1.5 本研究的主要內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
第2章 BmABCD_2 基因的全長克隆及表達(dá)分析
    2.1 前言
    2.2 實驗材料與儀器試劑
        2.2.1 實驗材料及處理
        2.2.2 主要儀器與設(shè)備
    2.3 主要試劑及配制
    2.4 實驗方法
        2.4.1 總RNA提取
        2.4.2 BmABCD_2 基因編碼區(qū)克隆
        2.4.3 家蠶ABCD_2 基因UTR區(qū)克隆
        2.4.4 兩個品系家蠶ABCD_2 基因表達(dá)譜分析
    2.5 結(jié)果與分析
        2.5.1 RNA樣品的提取結(jié)果
        2.5.2 家蠶ABCD_2 基因編碼區(qū)克隆結(jié)果
        2.5.3 家蠶ABCD_2 基因5’RACE和3’RACE克隆結(jié)果
        2.5.4 ABCD_2 基因cDNA全長擴增拼接結(jié)果
        2.5.5 兩個品系家蠶ABCD_2 基因表達(dá)譜分析
    2.6 討論
第3章 ABCD_2基因的序列分析及ABC家族的密碼子分析
    3.1 家蠶ABCD_2 基因的生物信息學(xué)分析
    3.2 家蠶ABCD_2 基因的序列分析結(jié)果
        3.2.1 .兩個品系的序列比對結(jié)果
        3.2.2 氨基酸組成和理化性質(zhì)分析
        3.2.3 疏水性/親水性的預(yù)測和分析
    3.3 家蠶ABC家族的密碼子分析
        3.3.1 數(shù)據(jù)來源及處理
        3.3.2 核苷酸的組成分析
        3.3.3 各參數(shù)的計算
        3.3.4 各參數(shù)相關(guān)性分析
        3.3.5 中性繪圖分析
        3.3.6 ENC繪圖分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 核苷酸含量與堿基組成分析結(jié)果
        3.4.2 同義密碼子相對使用度分析
        3.4.3 密碼子使用特性分析
        3.4.4 堿基組成與含量的相關(guān)性分析
        3.4.5 中性繪圖分析
        3.4.6 ENC與GC3相關(guān)性分析
    3.5 討論
第4章 RNA干涉ABCD_2 及與ABCD_2 互作蛋白的篩選
    4.1 前言
    4.2 實驗設(shè)備與試劑
        4.2.1 主要儀器與設(shè)備
        4.2.2 主要試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 RNA干涉BmABCD_2 對白玉N抗性的影響
        4.3.2 家蠶ABCD_2 基因重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3.3 重組表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化
        4.3.4 轉(zhuǎn)化細(xì)胞的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.3.5 表達(dá)結(jié)果檢測
        4.3.6 融合蛋白的GST柱親和純化
        4.3.7 GST-Pull down實驗
        4.3.8 肽指紋圖譜實驗
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 RNA干涉BmABCD_2 結(jié)果
        4.4.2 酶切鑒定
        4.4.3 重組蛋白的表達(dá)鑒定及純化結(jié)果分析
        4.4.4 GST-pull down結(jié)果
        4.4.5 肽指紋圖譜結(jié)果分析
    4.5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]家蠶三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子的鑒定及部分成員的克隆與功能分析[D]. 栗鳳鵬.江蘇科技大學(xué) 2011



本文編號：3238283