發(fā)布時(shí)間：2021-06-19 16:45

　　2-氯煙酸是一種重要的中間體,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和農(nóng)藥化學(xué)品合成。傳統(tǒng)化學(xué)法合成2-氯煙酸存在原料昂貴、副產(chǎn)物多、反應(yīng)條件嚴(yán)苛和環(huán)境污染大等缺陷,很難滿足當(dāng)下綠色合成的要求。酶催化因其高催化效率、高立體選擇性及環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn),已成為替代化學(xué)工業(yè)綠色轉(zhuǎn)型升級(jí)的重要途徑。因此,開(kāi)發(fā)綠色、高效的2-氯煙酸酶法合成具有重要意義。酰胺酶是一類重要的工具酶,可催化酰胺水解合成相應(yīng)的羧酸。本論文圍繞酰胺酶高效合成2-氯煙酸,通過(guò)半理性設(shè)計(jì)改造酰胺酶,對(duì)酶催化口袋及底物通道進(jìn)行結(jié)構(gòu)調(diào)控,提高了催化活力和熱穩(wěn)定性,為酰胺酶法合成2-氯煙酸奠定了基礎(chǔ)。1)以本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的重組酰胺酶Pa-Ami的突變體G175A為研究對(duì)象,通過(guò)穿線建模、通道分析和分子對(duì)接定位活性中心及底物通道中影響酶催化效率的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)。利用飽和突變結(jié)合高通量篩選,獲得5個(gè)活力提高的單突變體A378V、A378T、V402L、L403V和L403T,進(jìn)一步迭代突變后得到17個(gè)活力提高的突變體。其中,A378V/V402L/L403V的酶活最高,達(dá)到127.44 U·mg^-1�？疾炝薃378V/V402L/L403... 

【文章來(lái)源】：浙江工業(yè)大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Pam的結(jié)構(gòu)

GatA的催化中心Figure1-11.TheactivesiteofGatA.

RhAmidase的結(jié)構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]吡氟草胺結(jié)晶成核和生長(zhǎng)研究[D]. 趙丹洋.哈爾濱工業(yè)大學(xué) 2019
[3]奈韋拉平中間體CAPIC的合成研究[D]. 陳永兵.華東理工大學(xué) 2018
[4]地衣芽孢桿菌L-天冬酰胺酶基因的克隆表達(dá)及其分子改造[D]. 邵澤香.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[5]奈韋拉平合成工藝研究[D]. 楊英杰.浙江工業(yè)大學(xué) 2017
[6]分子改造提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶熱穩(wěn)定性[D]. 童理明.江南大學(xué) 2016
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[8]兩種定向進(jìn)化策略改造單胺氧化酶MAO-N-D5[D]. 馬元慧.杭州師范大學(xué) 2013
[9]2-氯煙酸的綠色合成工藝研究[D]. 葛林丹.浙江工業(yè)大學(xué) 2010
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