木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)是自然界中最豐富的可再生資源,也是唯一存在的能夠同時為人類提供液體、氣體以及固體燃料的可再生資源,并且可以利用木質(zhì)纖維素作為原料生產(chǎn)多種產(chǎn)品,有重要的社會經(jīng)濟(jì)效益。在自然界中,纖維素的降解主要通過微生物完成,微生物可以產(chǎn)生纖維素酶,其中真菌是目前發(fā)現(xiàn)的對纖維素降解最有潛力的微生物。因此本論文以篩選具有降解纖維素功能的紅豆杉內(nèi)生真菌為主要研究內(nèi)容。本研究由健康的東北紅豆杉根、莖、葉中分離純化得到了 164株內(nèi)生真菌,通過纖維素剛果紅透明圈實(shí)驗(yàn)初篩得到六株有降解纖維素能力的內(nèi)生真菌,又通過測定纖維素酶活力對這六株菌株進(jìn)行了復(fù)篩,篩選出一株產(chǎn)纖維素酶活性最高的菌株,并結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)特征對其進(jìn)行了鑒定。對篩選出的產(chǎn)纖維素酶活性最高的菌株進(jìn)行產(chǎn)酶條件優(yōu)化,之后在最佳產(chǎn)酶條件下考察其金花葵秸稈廢棄物中纖維素的降解效果,為其在降解農(nóng)林廢棄物的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。研究結(jié)果如下:1、篩選出一株產(chǎn)纖維素酶活力最高的東北紅豆杉內(nèi)生真菌,并對其進(jìn)行分類鑒定:利用纖維素剛果紅透明圈實(shí)驗(yàn)和纖維素酶活力測定實(shí)驗(yàn),篩選到一株高產(chǎn)纖維素酶的東北紅豆杉內(nèi)生真菌R4。結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué),鑒定出該... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－４用纖維素酶活性法篩選用于生產(chǎn)纖維素酶的真菌分離物??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???國麵??圖２－５產(chǎn)纖維素酶東北紅豆杉內(nèi)生真菌（Ａ）菌落形態(tài)；（Ｂ）顯微鏡下菌絲和孢子形態(tài)；??（Ｃ）掃描電鏡下菌絲形態(tài)；（Ｄ）和孢子形態(tài)。??Ｆｉｇ．?２－５?ＰＤＡ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｍｅｄｉｕｍ?ｆｏｒ?ｃｅｌｌｕｌａｓｅ?ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ?Ｔａｘｕｓ?ｃｕｓｐｉｄａｔａ?Ｓ．?ｅｔ?Ｚ．?ｃｕｓｐｉｄａｔｅ??ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ?ｆｕｎｇｉ?ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?（Ａ），?ｓｐｏｒｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?（Ｂ），?ｔｈｅ?ＳＥＭ?ｏｆ?ｈｙｐｈａｅ（Ｃ）?ａｎｄ??ｓｐｏｒｅ?（Ｄ）．??２．３．４．２分子生物學(xué)鑒定??隨著分子生物技術(shù)、生物信息技術(shù)的發(fā)展，越來越多的相關(guān)技術(shù)相繼應(yīng)用到內(nèi)生真??菌的研宄中。對內(nèi)生真菌的研宄在引入以ＤＮＡ分析為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)技術(shù)后，更是??飛速前進(jìn)，由從前傳統(tǒng)單調(diào)的形態(tài)學(xué)鑒定一步步向更加科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆肿由飳W(xué)鑒定邁進(jìn)，??現(xiàn)在對內(nèi)生真菌種間關(guān)系及分類地位的確定是同時應(yīng)用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的結(jié)??果。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ＰＣＲ），是一種用于擴(kuò)增特定ＤＮＡ片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它在??通過一系列體外酶促反應(yīng)復(fù)制特殊ＤＮＡ，這項(xiàng)核酸合成技術(shù)最大的特點(diǎn)是能快速大幅??度地增加微量的ＤＮＡ。目前，ＰＣＲ技術(shù)己經(jīng)被應(yīng)用到感染性疾并腫瘤、遺傳病等多??項(xiàng)臨床研宄領(lǐng)域；污染原因及檢測等環(huán)境領(lǐng)域。如ＤＮＡ指紋圖譜分析技術(shù)等基于ＰＣＲ??技術(shù)的新興技術(shù)在內(nèi)生真菌的鑒定和系統(tǒng)發(fā)育分析方面已經(jīng)十分普遍，特別是ＩＴＳ序列，??它的長度和序列變化較大，甚至可以區(qū)分關(guān)系非常近的種［１１３＿１１５］。??在完成Ｒ４的形態(tài)學(xué)鑒定之后，對其進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。

６．１???Ｒ４??Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ?ｓｐ．ＭＴ０２０３８６．１??６４???Ｐｅｎｉｃｉｌｆｉｕｍ?ｏｘａｌｉｃｕｍ?ＭＫ０３６０２０．１??８０?Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ?ｏｘａｌｉｃｕｍ?ＭＧ５４９３３０．１??ｅ〇?ＰｅｎｉｃｉｌＲｕｍ?ｏｘａｌｉｃｕｍ?ＭＫ１６３５３４．１??＿??Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ?ｏｘａｌｉｃｕｍ?ｆｖ１Ｈ８５７８８０．１??６９???Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ?ｏｘａｌｉｃｕｍ?ＭＨ９１１３５７．１??ｉ?１??０．００１０??圖２－７產(chǎn)纖維素酶的東北紅豆杉內(nèi)生真菌的系統(tǒng)發(fā)育樹??Ｆｉｇ．?２－７?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｏｆ?ｃｅｌｌｕｌａｓｅ?ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ?ｓｔｒａｉｎｓ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｔａｘｕｓ??ｃｕｓｐｉｄａｔａ?Ｓ．?ｅｔ?Ｚ．?．Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ?ｖａｌｕｅｓ?（１０００?ｔｒｅｅ?ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）?ａｒｅ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ａｔ?ｔｈｅ?ｎｏｄｅｓ．??２．４本章小結(jié)??目前從東北紅豆杉中已經(jīng)分離得到內(nèi)生真菌１６４株，其中從根部得到７１株、莖中??得到５１株、葉中得到４２株。從根部分離得到的內(nèi)生真菌占比較多，可能是土壤環(huán)境復(fù)??雜，存在多種根部入侵真菌馴化進(jìn)化。對這１６４株菌的菌落進(jìn)行觀察，將其進(jìn)行種屬分??類。初步判斷這些內(nèi)生真菌屬于青霉菌屬），曲霉屬（＾（—／＾／／奶切．），??葡萄座腔菌屬（５／７．），木霉屬（少．），頭孢霉屬??（切．），鐮刀菌屬（Ｆｕｓａｒｉｕｍ?ｓｐ．），鏈格孢屬（Ｊ／ｔｏＴ扣ｎｂ?），刺盤孢??雇｝?（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ?ｓｐ．），枝袍Ｍ｝（Ｃｌａｄｏｓ

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3223776