目的:構(gòu)建在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的-Omi/HtrA2基因融合表達(dá)載體,為后續(xù)研究Omi/HtrA2基因過表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的影響奠定基礎(chǔ)。方法:PCR擴(kuò)增HtrA2基因編碼框,用KpnI和BamHI將TS-HtrA2及目的載體pEC3.1（+）兩步法雙酶切,然后進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化,構(gòu)建基因重組載體radE5-HtrA2,包裝重組腺病毒,RT-PCR檢測(cè)重組腺病毒基因mRNA的表達(dá)并提取蛋白進(jìn)行Westernblot檢測(cè)。結(jié)果:重組真核表達(dá)載體radE5-HtrA2經(jīng)限制性內(nèi)切酶分析,雙酶切之后的條帶與理論值相符,測(cè)序結(jié)果未見堿基變異,提取轉(zhuǎn)染后細(xì)胞總蛋白進(jìn)行Westernblot檢測(cè),可測(cè)到目標(biāo)條帶。結(jié)論:成功構(gòu)建了基因重組載體radE5-HtrA2,并能在結(jié)腸癌細(xì)胞HT29中正常表達(dá),為后續(xù)研究Omi/HtrA2基因功能奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：科技視界. 2020,(16)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

HtrA2 RT-PCR結(jié)果

Western顯影

圖4 雙酶切radE5-HtrA2電泳圖譜

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]結(jié)腸癌組織NPRL2表達(dá)及其臨床意義研究[D]. 王千里.鄭州大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3209294