目前生命科學(xué)的研究進(jìn)入到了系統(tǒng)生物學(xué)階段,對于整體生命現(xiàn)象的研究,需要解決很多關(guān)鍵科學(xué)問題。1、如何保持樣品接近生理狀態(tài)?2、如何在細(xì)胞乃至組織層面上對樣品進(jìn)行大尺度的三維重構(gòu),得到細(xì)胞器、細(xì)胞和組織等的空間分布?電鏡常應(yīng)用廣泛的常規(guī)化學(xué)固定方法,但化學(xué)固定劑與生物樣品的交聯(lián)具有選擇性,容易造成假象。而近年來出現(xiàn)的高壓快速冷凍（High Pressure Freezing,HPF）和冷凍替代技術(shù)（Freezing Substitution,FS）可以使生物樣品快速冷凍固定,有效減少了樣品制備過程中化學(xué)試劑對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞,能夠觀察到細(xì)胞器近似自然狀態(tài)下的超微結(jié)構(gòu)。本文發(fā)展和完善了新的高壓冷凍技術(shù)和冷凍替代技術(shù)樣品制備方法用于電鏡超微結(jié)構(gòu)的觀察,并分別在酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和胰島組織的電鏡樣品制備中,獲得了細(xì)胞器在接近生理狀態(tài)的超微結(jié)構(gòu)。同時(shí)發(fā)展了聚焦離子束掃描電鏡（Focused Ion Beam scanning electron microscopy,FIB/SEM）三維重構(gòu)技術(shù),研究了II型糖尿病模型ob/ob小鼠胰島β細(xì)胞致密核心囊泡的變化,為糖尿病的發(fā)生提供了依據(jù)。單細(xì)胞生... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 研究背景
        1.1.1 電子顯微鏡概述
        1.1.2 電鏡樣品制備技術(shù)
        1.1.3 電鏡三維重構(gòu)
        1.1.4 模式生物-酵母
        1.1.5 糖尿病與胰島素
    1.2 研究現(xiàn)狀
        1.2.1 模式生物-酵母超微結(jié)構(gòu)研究現(xiàn)狀
        1.2.2 胰島素瘤細(xì)胞及胰島致密核心囊泡的超微結(jié)構(gòu)研究現(xiàn)狀
    1.3 研究意義及內(nèi)容
        1.3.1 研究意義
        1.3.2 研究內(nèi)容
第二章 新型高壓冷凍和冷凍替代技術(shù)制備酵母細(xì)胞電鏡樣品和超微結(jié)構(gòu)觀察
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 實(shí)驗(yàn)討論
第三章 高壓冷凍和冷凍替代技術(shù)研究大鼠胰島素瘤細(xì)胞(INS-1)的超微結(jié)構(gòu)
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 INS-1細(xì)胞形態(tài)觀察
        3.3.2 INS-1細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
    3.4 實(shí)驗(yàn)討論
第四章 雙束掃描電鏡技術(shù)研究小鼠胰島超微結(jié)構(gòu)
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 胰島β細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)
        4.3.2 β細(xì)胞的FIB/SEM重構(gòu)
        4.3.3 FIB/SEM三維重構(gòu)對ob/ob小鼠胰島素囊泡分布的研究
    4.4 實(shí)驗(yàn)討論
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3170256