哺乳動物的C型溶菌酶通過裂解細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖從而在宿主免疫中發(fā)揮作用。許多有關(guān)C型溶菌酶進化的研究都集中在其消化功能上,其中包括對反芻動物溶菌酶復(fù)制基因的研究。有趣的是,在蝙蝠中也有研究發(fā)現(xiàn),食蟲蝙蝠的C型溶菌酶基因同樣發(fā)生了基因復(fù)制和適應(yīng)性進化,研究人員推測這可能與食蟲蝙蝠需要消化幾丁質(zhì)有關(guān)。另外,研究人員在鼠耳蝠屬的蝙蝠中發(fā)現(xiàn)了數(shù)目最多的四個溶菌酶基因拷貝。以大足鼠耳蝠（Myotis ricketti）為例,我們計算了大足鼠耳蝠中四種溶菌酶的等電點,結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們之間差異較大。為了探索四種溶菌酶的功能差異,我們成功地體外表達了其中的三個蛋白（MricLyz-1,MricLyz-3和MricLyz-4）,并進行了功能實驗。結(jié)果表明在抗菌方面,MricLyz-1可能保留了溶菌酶蛋白原始的免疫功能。相對于MricLyz-1而言,MricLyz-3的最適pH值偏酸,可能在胃中有表達,而MricLyz-4則適應(yīng)了極酸的環(huán)境,可能在胃中發(fā)揮免疫功能。在消化方面,與MricLyz-1相比,MricLyz-4蛋白沒有演化出更強的與消化幾丁質(zhì)有關(guān)的功能。葉口蝠科蝙蝠作為數(shù)量僅次于蝙蝠科的第二大蝙蝠類... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 蝙蝠
        1.1.1 蝙蝠分類
        1.1.2 蝙蝠食性
        1.1.3 蝙蝠與免疫
        1.1.4 蝙蝠與消化
    1.2 基因復(fù)制
    1.3 溶菌酶
        1.3.1 溶菌酶在反芻動物中的研究
        1.3.2 溶菌酶在葉猴中的研究
        1.3.3 溶菌酶在食蟲蝙蝠中的研究
    1.4 本研究的目的和意義
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意義
第二章 大足鼠耳蝠C型溶菌酶的功能研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 大足鼠耳蝠胃組織總RNA提取
        2.2.2 大足鼠耳蝠Lyz基因擴增及膠回收
        2.2.3 大足鼠耳蝠Lyz基因菌液PCR
        2.2.4 亞克隆引物擴增
        2.2.5 表達載體雙酶切及回收
        2.2.6 重組質(zhì)粒鑒定
        2.2.7 重組質(zhì)粒序列比對
        2.2.8 單克隆的誘導(dǎo)與表達鑒定
        2.2.9 表達優(yōu)化
        2.2.10 可溶性分析
        2.2.11 親和純化
        2.2.12 Western blot和蛋白復(fù)性
        2.2.13 蛋白抗菌最適pH值測定
        2.2.14 蛋白消化最適pH值測定
    2.3 小結(jié)
    2.4 討論
第三章 吸血蝙蝠C型溶菌酶的分子進化研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 蝙蝠基因組DNA和總RNA提取
        3.2.2 優(yōu)化引物最適退火溫度
        3.2.3 蝙蝠Lyz基因大體系PCR擴增及膠回收
        3.2.4 蝙蝠Lyz基因菌液PCR
        3.2.5 蝙蝠溶菌酶序列比對
    3.3 材料與方法
        3.3.1 材料
        3.3.2 方法
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果分析
        3.4.2 選擇壓力結(jié)果分析
        3.4.3 蝙蝠溶菌酶的功能預(yù)測結(jié)果分析
    3.5 小結(jié)
    3.6 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文



本文編號：3168584