PRMT5是一種II型精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶,可以誘導(dǎo)對(duì)稱(chēng)的精氨酸甲基化,甲基化組蛋白和非組蛋白底物的精氨酸殘基。研究表明PRMT5在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起著重要作用。已知PRMT5為一種甲基轉(zhuǎn)移酶,且具有眾多的底物。因此研究PRMT5的甲基化功能是很有必要的。我們從以下角度探索了PRMT5對(duì)腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子TRAF2和核孤兒受體Nur77的甲基化作用,并進(jìn)一步對(duì)機(jī)制進(jìn)行了探究。第一,我們運(yùn)用免疫共沉淀、GST-Pulldown及免疫熒光等技術(shù)探討PRMT5與TRAF2的相互作用,并且我們構(gòu)建了TRAF2不同片段質(zhì)粒,把相互作用鎖定在TRAF2的TRAF結(jié)構(gòu)域。為了進(jìn)一步研究PRMT5對(duì)TRAF2的甲基化作用,我們?cè)?93T細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染有活性和沒(méi)有活性的PRMT5,發(fā)現(xiàn)有活性的PRMT5可以甲基化TRAF2。同時(shí),我們檢測(cè)到PRMT5可以調(diào)控TRAF2的蛋白表達(dá)并在一定程度上促進(jìn)TRAF2的泛素化。眾所周知,TRAF2是NF-κB信號(hào)通路中關(guān)鍵銜接蛋白,所以,我們用Western blot檢測(cè)了PRMT5對(duì)NF-κB信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的影響。有意思的是我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)TRAF2時(shí)... 

【文章來(lái)源】：廣西師范大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)索引
第一章 前言
    1.1 PRMT5的結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.1 精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶的甲基化機(jī)制
        1.1.2 PRMT5的結(jié)構(gòu)與功能
    1.2 NF-κB信號(hào)通路
        1.2.1 經(jīng)典的NF-κB
        1.2.2 非經(jīng)典的NF-κB
    1.3 TRAF2的結(jié)構(gòu)功能介紹
    1.4 Nur77的結(jié)構(gòu)及其功能
    1.5 二氫楊梅素（dihydromyricetin,DHM）
    1.6 Ⅱ型糖尿病
    1.7 本論文的研究目的
    參考文獻(xiàn)
第二章 PRMT5 通過(guò)甲基化TRAF2 調(diào)節(jié)TRAF2 介導(dǎo)的非經(jīng)典N(xiāo)F-κB信號(hào)通路
    2.1 引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 PEI轉(zhuǎn)染
        2.3.3 蛋白電泳及免疫印跡
        2.3.4 細(xì)胞免疫熒光
        2.3.5 RT-PCR實(shí)驗(yàn)
        2.3.6 質(zhì)粒構(gòu)建、表達(dá)與純化
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 PRMT5與TRAF2 存在相互作用
        2.4.2 TRAF2 甲基化及PRMT5對(duì)TRAF2 的調(diào)控作用
        2.4.3 PRMT5 促進(jìn)TRAF2 的泛素化
        2.4.4 PRMT5對(duì)NF-κB信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的影響
        2.4.5 TRAF2/PRMT5對(duì)TRAF3及NIK泛素化功能影響
        2.4.6 PRMT5 促進(jìn)TRAF2與c IAP1 的相互作用
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 二氫楊梅素靶向PRMT5/Nur77 復(fù)合物改善高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠II型糖尿病
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 免疫印跡
        3.3.3 SiRNA轉(zhuǎn)染
        3.3.4 分子對(duì)接
        3.3.5 圓二色譜
        3.3.6 等溫滴定
        3.3.7 Ⅱ型糖尿病模型
        3.3.8 血漿胰島素測(cè)定
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 PRMT5與Nur77 相互作用并甲基化Nur77
        3.4.2 DHM抑制PRMT5/Nur77 復(fù)合物并影響Nur77 磷酸化
        3.4.3 DHM與 Nur77 存在物理結(jié)合
        3.4.4 DHM調(diào)控AMPK磷酸化并可能與LKB1 相關(guān)
        3.4.5 DHM可以治療Ⅱ型糖尿病并可能靶向Nur77
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
總結(jié)與展望
碩士研究生期間發(fā)表或待發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3156230