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細(xì)胞內(nèi)局部Ca 2+ 釋放的實(shí)時(shí)成像研究

發(fā)布時(shí)間:2021-04-24 00:09
  鈣離子是細(xì)胞內(nèi)普遍存在的第二信使,在神經(jīng)元內(nèi)參與了神經(jīng)遞質(zhì)分泌等一系列重要活動(dòng)。神經(jīng)元中胞質(zhì)Ca2+的瞬變會(huì)通過(guò)細(xì)胞膜上鈣通道介導(dǎo)胞外Ca2+內(nèi)流,或從細(xì)胞內(nèi)Ca2+儲(chǔ)存庫(kù)(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、內(nèi)溶酶體和分泌泡)釋放。盡管目前Ca2+成像已取得進(jìn)展,但是“快”鈣信號(hào)和緩慢“關(guān)閉”特征要求使得直接觀察個(gè)體鈣庫(kù)的Ca2+釋放存在挑戰(zhàn)。本研究創(chuàng)新了胞內(nèi)Ca2+成像方法,以獲得超快速、高分辨局部胞內(nèi)鈣信號(hào),為胞內(nèi)鈣信號(hào)研究提供了快捷高效的研究新手段。(1)采用LAMP-EGFP指示溶酶體,EGTA作為胞內(nèi)鈣離子螯合劑,以Rhod2為鈣指示劑,采用Confocal線掃模式,實(shí)現(xiàn)了TRPA1介導(dǎo)的溶酶體鈣釋放的實(shí)時(shí)成像,該鈣信號(hào)不依賴于胞外鈣離子,但采用GPN可完全阻斷TRPA1介導(dǎo)的局部鈣信號(hào),表明這種方法可實(shí)時(shí)檢測(cè)胞內(nèi)溶酶體鈣釋放;(2)在原代海馬神經(jīng)元中,以Mitotracker green作為線粒體指示劑,采用相似的Confocal線掃模式,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)到FCCP介... 

【文章來(lái)源】:聊城大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】:56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
abstract
前言
第一章 細(xì)胞內(nèi)溶酶體中鈣離子釋放
    1.1 前言
    1.2 材料與方法
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
    1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.5 討論
第二章 細(xì)胞膜鈣離子通道介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.5 結(jié)論
第三章 細(xì)胞內(nèi)線粒體中鈣離子信號(hào)
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.5 討論
結(jié)論與展望
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào):3156299

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