發(fā)布時間：2021-04-21 10:00

　　瘋草是豆科棘豆屬（Oxytropis）和黃芪屬（Astragalus）有毒植物的統(tǒng)稱,其主要毒性成分是苦馬豆素（swainsonine,SW）,瘋草中的苦馬豆素主要由鏈格孢屬波狀芽管孢組瘋草內(nèi)生真菌（Alternaria Section Undiflum spp）產(chǎn)生。近年研究表明,在產(chǎn)苦馬豆素真菌中存在一類結(jié)構(gòu)相似的基因簇,稱為苦馬豆素合成基因簇（swainsonine biosynthesis gene cluster,SWN）。瘋草內(nèi)生真菌的 SWN基因簇主要由 swnA、swnR、swnN、swnH1、swnH2和swnK等基因組成,這些基因可能在真菌從L-哌可酸到苦馬豆素這一合成途徑中發(fā)揮著重要作用,但在瘋草內(nèi)生真菌中的具體功能仍未得到驗證。swnK基因是SWN基因簇中的多功能酶編碼基因,由A、KS、AT、SDR、SDRel等多個區(qū)域組成,可能在真菌苦馬豆素合成中發(fā)揮最主要的作用,swnK基因功能的研究,將為進(jìn)一步闡明瘋草內(nèi)生真菌合成苦馬豆素的機理奠定基礎(chǔ)。swnK基因是產(chǎn)苦馬豆素真菌的特有基因,若針對該基因構(gòu)建特異性的瘋草內(nèi)生真菌定量檢測方法,將為進(jìn)一步闡釋瘋草內(nèi)生真菌在瘋... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 產(chǎn)苦馬豆素瘋草內(nèi)生真菌相關(guān)基因的研究進(jìn)展
        1.1.1 瘋草內(nèi)生真菌的分類及其與苦馬豆素合成的關(guān)系
        1.1.2 瘋草內(nèi)生真菌中苦馬豆素合成相關(guān)基因
    1.2 實時熒光定量PCR的研究進(jìn)展
        1.2.1 實時熒光定量PCR的原理
        1.2.2 實時熒光定量PCR技術(shù)在真菌研究上的應(yīng)用
        1.2.3 實時熒光定量PCR技術(shù)在真菌研究中的前景與展望
    1.3 基因敲除技術(shù)在真菌基因功能研究中的應(yīng)用
2+介導(dǎo)的同源重組轉(zhuǎn)化">        1.3.1 原生質(zhì)體-Ca²⁺介導(dǎo)的同源重組轉(zhuǎn)化
        1.3.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的同源重組轉(zhuǎn)化
        1.3.3 產(chǎn)苦馬豆素瘋草內(nèi)生真菌的相關(guān)基因敲除技術(shù)研究現(xiàn)狀
    1.4 本研究目的和意義
第二章 產(chǎn)苦馬豆素瘋草內(nèi)生真菌實時熒光定量PCR檢測方法的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 試驗方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 實時熒光定量PCR引物的特異性
        2.2.2 實時熒光定量PCR方法的靈敏度
        2.2.3 熒光定量PCR的線性及其范圍
        2.2.4 黃花棘豆植物各組織部位真菌生物量與苦馬豆素含量的檢測
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 瘋草內(nèi)生真菌SWN基因簇相關(guān)基因表達(dá)模式研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 試驗方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 真菌中的苦馬豆素含量
        3.2.2 RNA瓊脂糖變性電泳及質(zhì)量結(jié)果
        3.2.3 內(nèi)參基因及目的基因引物的特異性檢測
        3.2.4 不同菌株間SWN基因簇各基因的表達(dá)模式
        3.2.5 突變位點分析結(jié)果
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 產(chǎn)苦馬豆素瘋草內(nèi)生真菌swnK基因的敲除
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 試驗方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 第一輪PCR擴增結(jié)果
        4.2.2 第二輪PCR擴增結(jié)果
        4.2.3 轉(zhuǎn)化子篩選與PCR法驗證
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
附錄3
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的靈芝遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及其在靈芝三萜生物合成研究中的應(yīng)用[D]. 師亮.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]產(chǎn)苦馬豆素瘋草內(nèi)生真菌的分離鑒定及其遺傳多態(tài)性研究[D]. 余永濤.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2009
[3]內(nèi)蒙古三種棘豆屬植物中苦馬豆素相關(guān)因子的研究[D]. 盧萍.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]甘肅波狀芽管孢的鑒定及波狀芽管孢真菌LAAO、KS基因的檢測[D]. 李金榮.寧夏大學(xué) 2018
[2]小麥赤霉菌FGSGL07836基因敲除及功能研究[D]. 彭海麗.內(nèi)蒙古師范大學(xué) 2017
[3]小麥赤霉菌MGV1相關(guān)基因FGSG09297的敲除及功能研究[D]. 劉超頔.內(nèi)蒙古師范大學(xué) 2017
[4]瘋草棘豆蠕孢菌吡咯啉5-羧化-還原酶基因敲除菌株的構(gòu)建[D]. 權(quán)海云.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[5]變異黃芪內(nèi)生真菌的誘變及SW合成突變菌株的篩選[D]. 白曉南.寧夏大學(xué) 2017
[6]檸檬醛對稻瘟病菌幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)的影響[D]. 張翠榮.貴州大學(xué) 2016
[7]瘋草內(nèi)生真菌-Undifilum oxytropis合成苦馬豆素的研究[D]. 張蕾蕾.寧夏大學(xué) 2014
[8]熒光定量PCR方法在土傳煙草青枯病生防研究中的應(yīng)用[D]. 陳巧玲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]禾谷鐮刀菌AMT1基因的功能研究[D]. 王光輝.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010
[10]產(chǎn)苦馬豆素真菌的分離鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化[D]. 馬堯.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010



本文編號：3151550