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基于金納米選擇性萃取與電泳聯(lián)用技術(shù)的生物痕量分析方法研究

發(fā)布時間:2020-09-28 09:54
   第一章緒論毛細管電泳(Capillary Electrophoresis,CE)已成為一種廣泛應用的分離技術(shù)。電容耦合非接觸電導檢測(Capacitively Coupled Contactless Conductivity Detection,C~4D)是一種通用性良好的檢測技術(shù),與CE聯(lián)用在生物、環(huán)境分析等領(lǐng)域具有廣泛的應用前景。對于基質(zhì)復雜且含量偏低的分析對象,樣品預處理技術(shù)成為色譜分析必不可少的程序。本章在對CE-C~4D聯(lián)用技術(shù)及其應用進展進行簡要概述的基礎(chǔ)上,著重評述了固相微萃取技術(shù)及其吸附劑材料的研究進展。第二章AuNPs-ME/CE-C~4D聯(lián)用技術(shù)在生物多胺痕量分析中的方法研究在這項工作中,檸檬酸鹽封端的金納米粒子(citrate-AuNPs)首次用于選擇性提取痕量多胺,腐胺(Put)和尸胺(Cad),同時利用場放大樣品堆積(FASS)和CE-C~4D分析技術(shù)(FASS-CE/C~4D)。Put和Cad通過胺基和檸檬酸鹽配體之間的靜電作用吸附在AuNPs表面。AuNPs-ME通過引入超聲有效縮短了準備時間(50 min),所需的樣品提取量僅為1 mL。此外,基于AuNPs-ME和在線FASS的協(xié)同富集顯著提高了檢測靈敏度,使富集因子達到1726-1887倍。在最佳條件下,Put和Cad可以很好地與潛在的共存物質(zhì)分離,然后通過CE-C~4D直接檢測,無衍生化。由于樣品消耗低,靈敏度高(LODs:0.070-0.17 ng/mL)和可接受的回收率(90-105%),AuNPs-ME/FASS-CE-C~4D提供了一種可直接測定人體呼出氣中多胺的快速、經(jīng)濟、環(huán)保的方法,在口腔和呼吸道炎癥的初步無創(chuàng)診斷方面具有潛在應用前景。第三章AuNPs-ME/CE-C~4D聯(lián)用技術(shù)在生物硫醇痕量分析中的方法研究在這項工作中,Tween 20封端的AuNPs(Tween 20-AuNPs)的高純化與選擇性富集性能與CE的高分離效率和C~4D的通用性相結(jié)合,采用Tween 20-AuNPs-ME/CE-C~4D聯(lián)用系統(tǒng),建立了一種唾液中主要生物硫醇GSH、Hcy和Cys的直接檢測方法。目標物通過與Tween 20-AuNPs形成金硫鍵被選擇性吸附于納米粒子表面。同時,基于場放大樣品堆積(FASS)和Tween 20-AuNPs-ME的協(xié)同富集效應,進一步提高了方法檢測靈敏度,富集因子達到2083-3112倍,靈敏度(LODs:2.0-5.7 ng/mL)和回收率(96-101%)較高。在最優(yōu)實驗條件下,GSH、Hcy和Cys可以很好地與潛在的共存物質(zhì)分離,然后直接通過CE-C~4D檢測,無需衍生。該方法有望為唾液中生物硫醇的直接靈敏檢測提供一種簡便、快速、經(jīng)濟的分析方法,在相關(guān)疾病的早期無創(chuàng)診斷中具有潛在應用前景。
【學位單位】:華東師范大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2019
【中圖分類】:O657.1;Q503
【部分圖文】:

毛細管電泳儀,分析技術(shù),高壓電源


分析技術(shù)中占據(jù)了一席之地[5]。第一節(jié) CE-C4D 聯(lián)用技術(shù)理以高壓電源為驅(qū)動力,毛細管為分離通道,基于目標分水性和分子的差異等特性進行分離的分析技術(shù),因此,C選擇不同的分離模式[6]。器主要由高壓電源、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測器以及分析物可通過高度差進樣、電動進樣、壓力進樣等方式引壓電源驅(qū)動下,在背景電解質(zhì)中依據(jù)淌度和分配比實現(xiàn)分,最終在色譜工作站中轉(zhuǎn)換成相應的譜圖信號。

等效電路圖,等效電路圖


結(jié)構(gòu)緊湊,無需在毛細管上創(chuàng)建任何檢測窗口了電極被污染。C4D 沿毛細管同軸放置,可以實測距離。兩個電子模塊獨立工作避免了檢測器電壓D 聯(lián)用技術(shù)不僅可以簡化現(xiàn)有儀器,而且還可以分析的便攜式裝置的開發(fā)[12]。報道使用 CE-C4D 方法成功檢測無機陽離子與陰[18]、生物活性化合物[19]以及手性化合物的分離[2測、藥物和臨床分析等方面。同時,CE-C4D 由作為現(xiàn)場便攜式儀器,探測器價格低廉,可實現(xiàn)圖 2 C4D 等效電路圖Fig.2. Diagram of C4D equivalent circuit

萃取時間,濃度,硫醇基,目標分析


圖 1 (A)金納米濃度和(B)萃取時間的影響Fig. 1. Effects of(A)AuNPs concentrationand(B) incubationtime ontheEFs ofthetarget analytesOther extraction conditions: extraction volume, 0.5 mL; analyte concentration, 10 ng mL-1eachremoving reagent, 0.010 M DCPP (dispersed in 10 μL anhydrous ethanol); and ultrasonic time, 10min.3.1.3 解析劑種類與濃度為了有效地從 AuNPs 表面除去多胺,解析劑應該與 AuNPs 具有更強的相互作用。由于硫醇基可以與 AuNPs 的表面作用形成穩(wěn)定的 Au-S 鍵,因而本實驗考察了 DTT,2-ME,DCPP 等多種常見巰基解析劑對目標物的解析程度,現(xiàn)階段乙醇統(tǒng)一作為解析劑的分散劑。如圖 2 所示,隨著各解析劑濃度的增加,目標分析物的 EFs 呈現(xiàn)先升后降的趨勢。當分別在以 0.10 M DCPP、0.10 M 2-ME 和

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