【摘要】：桿狀病毒是一類(lèi)具有囊膜的雙鏈環(huán)狀DNA病毒,在其生活史中,產(chǎn)生兩種不同類(lèi)型的病毒粒子:出芽型病毒粒子(budded virus,BV)和包埋型病毒粒子(occlusion-derived virus,ODV)。ODV負(fù)責(zé)病毒對(duì)中腸初始的口服感染,而B(niǎo)V則介導(dǎo)蟲(chóng)體其他組織之間的系統(tǒng)感染。在ODV囊膜表面分布著至少10個(gè)與口服感染相關(guān)的蛋白,被稱(chēng)為口服感染因子(per os infectivity factors,PIFs)。P74作為首個(gè)被報(bào)導(dǎo)的口服感染因子,也被稱(chēng)為PIF0,它在ODV感染中腸的過(guò)程中經(jīng)歷兩次順序剪切:第一次剪切發(fā)生于ODV從多角體(occlusion body,OB)堿解釋放的過(guò)程中;第二次剪切發(fā)生于ODV感染中腸上皮細(xì)胞的過(guò)程中。目前,對(duì)于P74第一次剪切的具體位點(diǎn)及其對(duì)口服感染的影響尚不明確。本論文對(duì)ODV囊膜蛋白P74的剪切現(xiàn)象進(jìn)行了深入分析研究,同時(shí)還探究了ODV囊膜表面口服感染因子間的相互作用,為深入揭示桿狀病毒口服感染的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。第一章介紹了研究背景,包括桿狀病毒的生活史及口服感染的詳細(xì)過(guò)程。同時(shí)對(duì)口服感染因子,特別是P74的研究現(xiàn)狀進(jìn)行總結(jié)分析。第二章對(duì)苜蓿銀紋夜蛾核多角體病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)P74蛋白的剪切進(jìn)行了研究。使用感染細(xì)胞樣品和蟲(chóng)體來(lái)源的ODV樣品進(jìn)行Western blot檢測(cè),發(fā)現(xiàn)P74在細(xì)胞中不發(fā)生剪切,而在ODV樣品中發(fā)生剪切。隨后使用特異性抑制胰酶活性的大豆胰蛋白酶抑制劑(soybean trypsin inhibitor,SBTI)進(jìn)行OB堿解的時(shí)相實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)SBTI加入時(shí)間越晚,P74剪切后的蛋白量越多,由此我們認(rèn)為P74第一次剪切的可能是由胰蛋白酶或是類(lèi)胰蛋白酶介導(dǎo)的。隨后,根據(jù)剪切條帶的大小及生物信息學(xué)分析,推測(cè)了四個(gè)保守的精氨酸位點(diǎn)可能為剪切位點(diǎn),并通過(guò)Bac-to-Bac系統(tǒng)構(gòu)建了缺失p74,回復(fù)p74及七種預(yù)測(cè)剪切位點(diǎn)單、多點(diǎn)組合突變的重組病毒。我們對(duì)重組病毒進(jìn)行掃描電鏡及透射電鏡觀察,發(fā)現(xiàn)p74缺失及點(diǎn)突變不影響OB的外部形態(tài)及內(nèi)部ODV的包埋。我們將重組病毒的ODV純化后進(jìn)行Western blot檢測(cè),發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變R325Q/R334Q能夠部分抑制P74剪切,四點(diǎn)突變R319Q/R323Q/R325Q/R334Q能夠完全抑制P74的剪切,而其他的突變體不能,表明P74發(fā)生第一次剪切的位點(diǎn)是第319、323、325和334位的精氨酸。第三章對(duì)AcMNPV ODV囊膜表面10個(gè)口服感染因子之間的相互作用進(jìn)行了探究。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)酵母雙雜交的方法雙向驗(yàn)證各個(gè)PIF之間的相互作用,除去PIF5和VP91存在自激活現(xiàn)象無(wú)法研究外,共發(fā)現(xiàn)了8對(duì)雙向互作的蛋白,分別是:P74-PIF4、PIF1-PIF2、PIF1-PIF3、PIF1-PIF4、PIF2-PIF3、PIF2-PIF4、PIF3-PIF4、PIF4-Ac110。該實(shí)驗(yàn)提示PIFs之間存在著廣泛的相互作用,支持了PIF以復(fù)合物形式發(fā)揮功能這一發(fā)現(xiàn),并為探究各個(gè)PIF蛋白在PIF復(fù)合物中可能的排布方式提供了重要數(shù)據(jù)。第四章為總結(jié)和展望,對(duì)本文的研究進(jìn)行了總結(jié)歸納。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：Q939.4
【圖文】：

圖 1.1 桿狀病毒的生活史 (Rohrmann, 2013)e 1.1Baculovirus lifecycle.Baculovirus canbeabsorbed bylarvae taking virus moved to the midgut, ODVs were released from OBs to infect mido start oral infection (A). BVs were produced in infected cells and then rely cells, which was called systemic infection (B). Apart from BVs, oted cells nucleus can be wrapped into ODVs and then assembled with otheIn the end, host cells lysed and OBs were released to start next romann, 2013).病毒結(jié)構(gòu) ODV 在結(jié)構(gòu)上具有相似的核衣殼組分 (Slack andArif, 200囊膜上 (Hou et al., 2013)。首先在來(lái)源上，BV 的囊膜來(lái)源 ODV 的囊膜來(lái)源于感染細(xì)胞的核內(nèi)膜 (BraunagelandSum膜組分上二者也有很大差異，其中膜融合蛋白尤為明顯 (毒入侵和膜融合為單個(gè)蛋白——GP64 或 F 蛋白，GP64 屬于

圖 1.2 HearNPV BV 與 ODV 的蛋白組成和定位模式圖 (Hou et al., 2013)igure1.2ProteinscompositionsandlocalizationsofHearNPVBVandODV(Houetal.,20.1.3 桿狀病毒的應(yīng)用因?yàn)闂U狀病毒ODV與BV的組織嗜性不同，因此在應(yīng)用上也有一定的差異DV 介導(dǎo)口服感染，因此可作為生物殺蟲(chóng)劑，同時(shí)桿狀病毒特異性地感染節(jié)物 (Thiem,2009)，其安全性得到極大的保障，目前以 ODV 為基礎(chǔ)研發(fā)的生蟲(chóng)劑得到國(guó)內(nèi)外的認(rèn)可 (Yang et al., 2017 , Sun, 2015 , Inceoglu et al., 2001)。桿狀病毒的 BV 可作為基因表達(dá)載體，在感染的細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)外源蛋Keiletal.,2009,Miller,1989)。1993 年自“bacmid”系統(tǒng)開(kāi)發(fā)以來(lái) (Luckowet993)，BV 作為外源蛋白表達(dá)的系統(tǒng)一直在不斷的完善與發(fā)展，目前已被廣泛，同時(shí)像病毒樣顆粒 (virus-like particles, VLP) 及其他很多類(lèi)疫苗也是由桿毒表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn) (Contreras-Gomez et al., 2014 , Lin et al., 2014)。此外，桿狀病毒可通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法高效進(jìn)入到包括人在內(nèi)多種動(dòng)物細(xì)胞

圖 1.3 PIF 復(fù)合物模式圖 (Wang et al., 2019)re 1.3 Model of PIF complex formation (Wang et al.,主細(xì)胞可能是通過(guò) ODV 囊膜和中腸細(xì)胞質(zhì)每個(gè) PIF 在口服感染過(guò)程行使的功能尚不明05)，P74、PIF1、PIF2 在 ODV 吸附宿主細(xì)胞et al., 2014) 借用 EGFP 標(biāo)記的 ODVs 發(fā)現(xiàn)缺。迄今為止，ODV 膜融合蛋白及受體結(jié)合蛋間相互作用白互作的手段通過(guò)形成復(fù)合物的形式來(lái)介導(dǎo)口服感染，因

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 泉琳;;桿狀病毒,“僵尸操控大師”[J];科學(xué)新聞;2014年24期

2 劉高強(qiáng);余曉丹;;昆蟲(chóng)桿狀病毒分子生物學(xué)及其應(yīng)用研究的新進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年09期

3 劉強(qiáng),丁翠;桿狀病毒部分功能基因的研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);2001年02期

4 郭錫杰,吳友良;昆蟲(chóng)桿狀病毒在生物技術(shù)研究中的應(yīng)用[J];常熟高專(zhuān)學(xué)報(bào);2001年04期

5 陸承平;注意桿狀病毒科分類(lèi)的變化[J];中國(guó)病毒學(xué);2001年04期

6 辛華;;利用桿狀病毒以蟲(chóng)治蟲(chóng)[J];國(guó)際科技交流;1987年09期

7 曾莉;;一種可溶性CD4蛋白質(zhì)選擇性抑制HIV復(fù)制與合胞體的形成[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1988年05期

8 邢祖培,扈利華,宮云秀;昆蟲(chóng)桿狀病毒對(duì)哺乳動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)感染[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);1988年01期

9 胡裕文,智剛;桿狀病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);1988年02期

10 邱并生,裴美云,逯好英,馬賢凱;乙型肝炎病毒表面抗原基因在桿狀病毒載體與昆蟲(chóng)細(xì)胞體系中的高效表達(dá)[J];科學(xué)通報(bào);1988年08期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 葉林柏;陳海雷;郜金榮;朱應(yīng);梁東瑞;;昆蟲(chóng)桿狀病毒與哺乳動(dòng)物的相互作用[A];全國(guó)生物防治學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];1991年

2 龐義;;昆蟲(chóng)桿狀病毒基因工程[A];殺蟲(chóng)微生物[C];1992年

3 蔡艷清;許東林;周?chē)?guó)輝;李華平;;廣東首次發(fā)現(xiàn)甘蔗桿狀病毒[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2004年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

4 徐正銀;周龍武;唐瑤;呂榜麗;秦碧霞;溫榮輝;陳保善;;廣西甘蔗桿狀病毒的檢測(cè)與分布調(diào)查[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2015年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2015年

5 全滟平;潘慧慧;畢臻樂(lè);于威;;家蠶桿狀病毒bm64基因的功能研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2014年學(xué)術(shù)交流大會(huì)暨浙江省第十一屆學(xué)會(huì)會(huì)員代表大會(huì)會(huì)議論文集[C];2014年

6 萬(wàn)永繼;;桿狀病毒在組織細(xì)胞內(nèi)的感染傳輸機(jī)制及垂直傳播途徑的分析[A];中國(guó)蠶學(xué)會(huì)商品性小蠶飼養(yǎng)規(guī)程和蠶病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 談瑩;姜凌;王曼麗;尹飛飛;鄧菲;劉買(mǎi)利;胡志紅;王華林;;桿狀病毒囊膜蛋白融合肽的NMR結(jié)構(gòu)和功能研究[A];第十五屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2008年

8 杜恩岐;閆鋒;盧楠;齊義鵬;;桿狀病毒新調(diào)控基因p13的結(jié)構(gòu)功能及殺蟲(chóng)潛力研究[A];第十屆全國(guó)殺蟲(chóng)微生物學(xué)術(shù)研討會(huì)暨全國(guó)生物農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)研究與產(chǎn)業(yè)化會(huì)議論文摘要集[C];2006年

9 姜靜穎;王斌;宋良國(guó);;一種無(wú)包涵體桿狀病毒粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)電鏡觀察[A];第九次全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文摘要集（Ⅰ）[C];1996年

10 段宇;周紅文;李倩;汪承亞;趙紅;覃又文;劉超;陳家偉;;利用桿狀病毒載體在家蠶幼蟲(chóng)中高效表達(dá)人胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(hIGF-1)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 記者 王雪飛;TPO基因可治療血小板減少癥[N];健康報(bào);2000年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄭秦;昆蟲(chóng)桿狀病毒經(jīng)口感染因子間的相互作用及P74與宿主中腸互作蛋白的研究[D];浙江大學(xué);2017年

2 姚倫廣;囊膜蛋白P74在桿狀病毒侵染宿主的初級(jí)感染過(guò)程中作用機(jī)制的研究[D];武漢大學(xué);2004年

3 梁昌鏞;桿狀病毒與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相互作用的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2005年

4 周文科;桿狀病毒新型表達(dá)系統(tǒng)及P74基因功能和殺蟲(chóng)劑800畝田間釋放研究[D];武漢大學(xué);2005年

5 陳寅;桿狀病毒基因組掃描技術(shù)篩選病毒因子和順式元件及其表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

6 林旭璦;桿狀病毒泛素、多角體基因啟動(dòng)子分析及表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

7 儲(chǔ)文明;兩種與生育功能有關(guān)的蛋白基因BSD-84及BED-20在人染色體上的定位及其在桿狀病毒-昆蟲(chóng)體系中的表達(dá)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1993年

8 董春升;桿狀病毒p10基因的結(jié)構(gòu)和功能研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2006年

9 宋建華;桿狀病毒介導(dǎo)的基因表達(dá)及p35抗生物和非生物脅迫的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2006年

10 姚相杰;桿狀病毒介導(dǎo)的丙肝病毒可感染體外細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳誠(chéng);桿狀病毒口服感染因子PIF5功能初步研究[D];中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所);2019年

2 張楠;桿狀病毒AcMNPV口服感染因子P74的剪切位點(diǎn)鑒定[D];中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所);2019年

3 蘇霞;桿狀病毒AcMNPV ac51、ac73、ac75基因的功能研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

4 魏思琪;寨卡病毒NS5單克隆抗體的制備及NS1蛋白在桿狀病毒中的表達(dá)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

5 許書(shū)美;AcMNPV-BmK IT對(duì)桿狀病毒Ac109與Ac30蛋白的調(diào)控研究[D];山西大學(xué);2018年

6 宋姍姍;構(gòu)建表達(dá)IBDV主要保護(hù)性抗原的桿狀病毒及其免疫效果的研究[D];黑龍江大學(xué);2013年

7 蘇沛豪;犬λ-干擾素在昆蟲(chóng)桿狀病毒中的表達(dá)及其生物活性研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

8 劉龍;RBSDV P7-2基因重組AcMNPV及其生物學(xué)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2018年

9 龐俊星;桿狀病毒F蛋白的研究[D];江蘇大學(xué);2006年

10 毛海濤;基于桿狀病毒F蛋白的真核表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建[D];華中師范大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2773815