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乳酸菌胞外多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)分析

發(fā)布時(shí)間:2020-07-14 19:25
【摘要】:乳酸菌胞外多糖(Exopolysaccharides,EPS)有兩種形式,分泌到細(xì)胞外從而形成粘附于細(xì)胞表面的為莢膜多糖,存在于細(xì)胞周邊培養(yǎng)基中的為黏液多糖,這些多糖是改善產(chǎn)品的亮度和質(zhì)感必不可少的條件。凝膠性是乳清蛋白(Whey protein,WP)重要特性之一,其作為增稠劑、微膠囊壁材、食用膜以及脂肪替代物應(yīng)用都是凝膠特性的一種體現(xiàn)。乳清蛋白凝膠特性受多種因素影響。本論文主要以分離自嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus,S.thermophilus)6063 的胞外多糖為研究對(duì)象,對(duì)胞外多糖結(jié)構(gòu)特性及EPS/WP混合體系流變學(xué)特性進(jìn)行分析。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.采用纖維素凝膠層析對(duì)粗提的EPS進(jìn)行分離,通過特制的多糖凝膠純化系統(tǒng)進(jìn)行純化得到兩種EPS,一種為中性多糖ST1-EPS,一種為酸性多糖ST2-EPS。2.通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的檢測分析,結(jié)果表明ST1-EPS主要由半乳糖,葡萄糖和鼠李糖組成,占80%以上,還含有一些甘露糖;ST2-EPS主要由半乳糖,甘露糖和葡萄糖組成;通過相對(duì)分子質(zhì)量的測定,ST1-EPS的分子量為2.197×103 kDa,ST2-EPS 的分子量為 1.419×102 kDa。3.通過紅外光譜儀的檢測,結(jié)果表明ST1-EPS和ST2-EPS均含有官能團(tuán)-OH、-CH2、-COOH、酰胺基、C-O-C及C-C-O;其中ST2-EPS中含有糖醛酸。4.通過核磁共振的檢測分析,結(jié)果表明ST1-EPS有5種糖殘基,其中4種為α構(gòu)型的吡喃糖殘基,1種為β構(gòu)型的吡喃糖殘基。ST2-EPS有5種糖殘基,其中3種為α構(gòu)型的吡喃糖殘基,2種為β構(gòu)型的吡喃糖殘基。5.EPS/WP體系流變學(xué)特性測定結(jié)果表明,兩種EPS均能夠增加EPS/WP體系的表觀黏度,且不同金屬離子、pH值和溫度的處理?xiàng)l件對(duì)兩種EPS/WP體系流變學(xué)特性均有較大影響但不相同。
【學(xué)位授予單位】:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:TS201.3
【圖文】:

曲線,曲線,單糖組成,粗多糖


3結(jié)果分析逡逑3.1邐EPS分離純化結(jié)果逡逑采用纖維素離子交換層析的方法對(duì)所提取的粗多糖進(jìn)行分離。由圖1可知粗多糖逡逑經(jīng)DEAE-FAST-FLOW離子交換柱得到2個(gè)組分I和II。其中I是被水洗脫下來,逡逑因此不帶電荷,為中性多糖;II是在含有NaCl洗脫下來,即帶負(fù)電荷,為酸性多逡逑糖。逡逑■i邋fti邐逡逑0邐20邐40邐60邐80邐100邐120邐140逡逑試管數(shù)逡逑圖1邋DEAE-FAST-FLOW柱洗脫曲線逡逑Figure.邋1邋Elution邋curve邋of邋cmde邋polysaccharide邋DEAE-FAST-FLOW邋strain逡逑分別對(duì)分離出的兩個(gè)峰的組分進(jìn)行收集,通過博睿糖生物技術(shù)有限公司特制的逡逑多糖凝膠純化系統(tǒng)進(jìn)行純化,得到兩個(gè)單一峰,再分別對(duì)兩個(gè)峰進(jìn)行收集,得到兩逡逑種純化后的多糖ST1-EPS和ST2-EPS。逡逑3.2邐EPS單糖組成及相對(duì)分子量的測定結(jié)果逡逑由表5可知,ST1-EPS主要單糖組成為半乳糖、葡萄糖和鼠李糖,含有少量甘逡逑露糖,它們的百分比是0.430:邋0.294:邋0.178:邋0.098。ST2-EPS的單糖組成主要為半逡逑乳糖、甘露糖和葡萄糖;它們的百分比是0.616:邋0.268:邋0.117。逡逑用Breeze邋GPC軟件以標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)IgMw對(duì)洗脫體積作圖,逡逑并進(jìn)行回歸處理

紅外光譜圖,紅外光譜圖,信號(hào)峰,殘基


.-邋EPS核磁共振檢測結(jié)果逡逑ST1-EPS的1HNMR譜圖如圖4所示,可以看到,在異頭質(zhì)子區(qū)內(nèi)有5個(gè)信別位于化學(xué)位移值為邋4.38邋ppm,4.57邋ppm,邋4.92邋ppm,5.15邋ppm邋和邋5.37邋ppm邋處。逡逑5個(gè)信號(hào)峰強(qiáng)度,比值接近,說明ST1-EPS含有幾乎相同數(shù)量的5種糖殘基[48]。逡逑

圖譜,化學(xué)位移


圖6邋ST1邋-EPS的HSQC圖譜逡逑Figure.6邋HSQC邋NMR邋spectra邋of邋ST邋1-EPS逡逑STl-EPS的1H-1。″澹茫希樱賵D譜(圖7邋)表示的是相鄰碳上的直接相連的氫之間的相逡逑關(guān)關(guān)系,由該圖譜可分別歸屬出各個(gè)糖環(huán)上的碳和氫的化學(xué)位移。逡逑j逡逑I邋LXl-S3i8i2tW^if邐|逡逑j邐SW邋020邐58逡逑4邋Y":s逡逑邐3邋A0邋?邐0邋0邋^逡逑—.——邋>邐番擎d邐M逡逑i1邐I逡逑:邐邋r逡逑S.6邐s.4邐i-2邐5.0邐4?邐4.6邐4邋4邋4J邋4.0邐3.8邐3_6邐3,4邐3-2邐3.0逡逑圖7邋ST1-EPS的1H」H邋COSY圖譜逡逑Figure.7邐'H-'H邋COSY邋NMR邋spectra邋of邋ST邋1-EPS逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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