耐福射奇球菌pprM基因?qū)Υ竽c桿菌抗氧化及抗輻射的影響

發(fā)布時(shí)間：2020-07-13 08:08

【摘要】：研究目的:pprM基因?qū)δ洼椛淦媲蚓?DR菌)的極端抗氧化和抗輻射能力有著十分重要的作用。本研究旨在探究外源性表達(dá)DR菌pprM基因能否提高大腸桿菌抗氧化和抗輻射能力,為研究pprM基因功能及構(gòu)建高抗環(huán)境壓力的大腸桿菌工程菌提供依據(jù)。研究方法:1、鑒定轉(zhuǎn)耐輻射奇球菌pprM基因的大腸桿菌DH5ɑ,檢測各型大腸桿菌對(duì)過氧化氫抵抗能力,研究pprM基因能否提高大腸桿菌DH5ɑ抗氧化能力。應(yīng)用ROS、GSH、SOD、CAT檢測試劑盒檢測過氧化氫(5 mmol/L、10 mmol/L)處理后野生型大腸桿菌DH5ɑ、空質(zhì)粒型大腸桿菌DH5ɑ以及轉(zhuǎn)pprM基因大腸桿菌DH5ɑ體內(nèi)自由基、各氧化酶含量或活性,研究pprM基因提高大腸桿菌抗氧化能力的可能機(jī)制。2、將pGEX-6p-1-pprM質(zhì)粒、pGEX-6p-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21,觀察轉(zhuǎn)pprM基因的大腸桿菌BL21在接受γ輻照后生長速度的變化,研究pprM基因能否提高大腸桿菌抗輻照能力。通過應(yīng)用GSH、SOD、CAT檢測試劑盒檢測輻照(100Gy、200Gy)處理后野生型大腸桿菌BL21、空質(zhì)粒型大腸桿菌BL21以及轉(zhuǎn)pprM基因大腸桿菌BL21體內(nèi)自由基、各氧化酶含量或活性,研究pprM基因提高大腸桿菌抗輻射能力的可能機(jī)制。3、檢測過氧化氫處理后轉(zhuǎn)pprM基因大腸桿菌BL21、空質(zhì)粒型大腸桿菌BL21以及野生型大腸桿菌BL21紅外光譜,研究pprM基因?qū)Υ竽c桿菌氧化應(yīng)激相關(guān)官能團(tuán)的變化。研究結(jié)果:1、比較野生型大腸桿菌DH5ɑ、空質(zhì)粒型大腸桿菌DH5ɑ以及轉(zhuǎn)pprM基因大腸桿菌DH5ɑ在過氧化氫抑菌圈實(shí)驗(yàn)中抑菌圈大小的差異,發(fā)現(xiàn)pprM基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌后能提高大腸桿菌抗過氧化氫的能力。在用過氧化氫處理后,與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)入pprM基因的大腸桿菌體內(nèi)ROS含量降低,而超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性升高,表明pprM基因在大腸桿菌體內(nèi)可能是通過提高大腸桿菌抗氧化酶類的活性,清除其體內(nèi)自由基而發(fā)揮其抗氧化功能。2、成功構(gòu)建含pprM基因的大腸桿菌BL21。分別對(duì)輻照后野生型大腸桿菌BL21、空質(zhì)粒型大腸桿菌BL21以及轉(zhuǎn)pprM基因大腸桿菌BL21生長情況以及體內(nèi)的SOD、GSH、CAT的量或活性分別進(jìn)行了測定,檢測發(fā)現(xiàn)在用γ輻照處理后,與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)入pprM的大腸桿菌生長速度更快,體內(nèi)超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性升高,表明pprM在大腸桿菌體內(nèi)可能可以通過提高大腸桿菌抗氧化酶類的活性,減少輻照對(duì)于大腸桿菌的氧化損傷。3、比較野生型大腸桿菌與轉(zhuǎn)pprM基因大腸桿菌過氧化氫處理后的紅外光譜圖,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)入pprM基因的大腸桿菌其氨基、羧基等活性基團(tuán)在過氧化氫處理后峰值有所變化,說明pprM基因能對(duì)大腸桿菌這些基團(tuán)產(chǎn)生改變。研究結(jié)論:1、耐輻射奇球菌pprM基團(tuán)轉(zhuǎn)入大腸桿菌能夠提高大腸桿菌的抗氧化能力及抗輻射能力。2、pprM基團(tuán)可通過提高大腸桿菌SOD、GSH、CAT等抗氧化酶類的活性發(fā)揮其抗氧化抗輻射功能。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：Q78
【圖文】：

序列,PCR鑒定,重組質(zhì)粒,質(zhì)粒

-1-pprM 質(zhì)粒大腸桿菌 DH5ɑ 的鑒定在第 1 泳道有明顯約為 400 bp 的目的條帶 XhoI 對(duì)提取的質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，如.4 kb 的兩個(gè)條帶，表明目的基因 pprM 后把雙酶切鑒定為陽性的菌株其質(zhì)粒寄 2.3 所示，利用 Blast 程序?qū)λ鶞y得序列上結(jié)果表明 pprM 基因序列正確，說明所丟失無突變可以用于下一步實(shí)驗(yàn)。

重組質(zhì)粒