玉米赤霉烯酮（F-2）廣泛存在于小麥、谷物等糧食或飼料中,人類或動物食用受到真菌毒素污染的食物后,會引起潛在的健康危害,因此對食品中的F-2毒素進行有效地監(jiān)控和快速檢測是防止其危害人類健康的重要手段。F-2毒素的免疫分析檢測方法的開發(fā)與應用主要基于競爭免疫分析模式,然而全抗原的合成與制備主要依賴于化學合成手段,在合成過程中使用的標準品及有毒試劑對操作人員的身體健康存在潛在的危害。越來越多的研究人員開始改進傳統(tǒng)抗原的制備方法,尋找真菌毒素的替代物,并開發(fā)基于真菌毒素抗原模擬物的綠色免疫分析方法。利用噬菌體展示技術(shù)淘選真菌毒素模擬表位,并采用基因工程手段和原核表達體系真菌毒素生物合成全抗原模擬物,該方法可制備成本低廉、性能穩(wěn)定、簡單易得、綠色無毒的真菌毒素化學合成抗原替代物。本研究旨在利用噬菌體展示多肽技術(shù),淘選F-2毒素的環(huán)七肽和線性十二肽噬菌體模擬表位,生物合成F-2毒素全抗原作為傳統(tǒng)化學合成抗原的替代物,以期對比分析環(huán)七肽和線性十二肽的模擬表位在噬菌體和生物合成全抗原兩種形式下免疫分析性能的差異,并探究生物合成全抗原模擬物在免疫學檢測分析方法中的應用。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.以抗... 

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語
第1章 文獻綜述
    1.1 玉米赤霉烯酮及其研究進展
        1.1.1 玉米赤霉烯酮的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)
        1.1.2 F-2毒理性質(zhì)
        1.1.3 F-2的限量標準
        1.1.4 F-2檢測方法的研究進展
    1.2 噬菌體展示環(huán)肽的研究進展及應用
        1.2.1 噬菌體展示技術(shù)簡介
        1.2.2 噬菌體展示環(huán)肽技術(shù)
        1.2.3 噬菌體展示環(huán)肽技術(shù)的應用
    1.3 真菌毒素抗原模擬物的研究進展
        1.3.1 噬菌體展示多肽
        1.3.2 抗獨特型抗體
        1.3.3 體外重組蛋白表達系統(tǒng)研究進展
    1.4 本課題研究的內(nèi)容和意義
        1.4.1 研究意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
第2章 噬菌體展示F-2模擬表位肽的淘選及鑒定
    2.1 實驗材料、儀器和試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 噬菌體展示F-2模擬表位肽的親和淘選
        2.2.2 噬菌體展示F-2模擬表位肽的活性鑒定
        2.2.3 建立基于噬菌體展示F-2模擬表位肽的標準曲線
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 噬菌體展示F-2模擬表位肽的親和淘選
        2.3.2 陽性克隆的鑒定
        2.3.3 陽性克隆的特異性鑒定
        2.3.4 噬菌體多肽陽性克隆氨基酸序列鑒定
        2.3.5 建立基于噬菌體展示F-2模擬表位肽的標準曲線
    2.4 討論
        2.4.1 影響淘選的因素
        2.4.2 陽性克隆氨基酸序列分析
    2.5 小結(jié)
第3章 基于噬菌體展示環(huán)七肽的F-2全抗原生物合成
    3.1 實驗材料、儀器和試劑
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 實驗試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 Peptides-MBP重組融合表達載體的構(gòu)建
        3.2.2 F-2全抗原Peptide-MBP的生物合成
        3.2.3 F-2全抗原Peptide-MBP活性驗證
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 Peptide-MBP重組融合表達載體的構(gòu)建
        3.3.2 Peptides-MBP重組融合蛋白的原核表達
        3.3.3 Peptides-MBP全抗原的免疫分析性能鑒定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 F-2多肽模擬表位-熒光素酶融合蛋白的原核表達
    4.1 實驗材料、儀器和試劑
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗儀器
        4.1.3 實驗試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 pET-22b-Peptide-Nluc融合表達載體的構(gòu)建
        4.2.2 Peptide-Nluc融合蛋白的原核表達及純化
        4.2.3 Peptide-Nluc融合蛋白的活性分析
        4.2.4 基于Peptide-Nluc直接競爭一步生物熒光酶聯(lián)免疫分析法的建立
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 F-2多肽-熒光素酶融合蛋白表達載體的構(gòu)建
        4.3.2 Peptide-Nluc融合蛋白的原核表達
        4.3.3 Peptide-Nluc融合蛋白活性驗證
    4.4 小結(jié)
第5章生物合成抗原模擬物介導的三重熒光免疫層析技術(shù)的應用研究
    5.1 實驗材料、儀器和試劑
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 三重試紙條原理圖
        5.2.2 生物合成全抗原的原核表達及純化
        5.2.3 試紙條的組裝
        5.2.4 熒光探針的制備
        5.2.5 熒光試紙條參數(shù)的優(yōu)化
        5.2.6 熒光試紙條檢測性能的評估
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 熒光探針的制備及表征
        5.3.2 試紙條參數(shù)的優(yōu)化
        5.3.3 三重熒光試紙條半定量檢測標準曲線
        5.3.4 三重熒光試紙條特異性評估
        5.3.5 三重熒光試紙條準確度及精密度分析
    5.4 討論
        5.4.1 影響試紙條靈敏度的因素
        5.4.2 生物合成抗原的成本分析
    5.5 小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[3]基于模擬表位的玉米赤霉烯酮全抗原生物合成及其免疫學檢測性能的研究[D]. 何慶華.南昌大學 2012

碩士論文
[1]玉米赤霉烯酮對小鼠腸道黏膜及IPEC-J2細胞損傷作用的研究[D]. 王新.吉林大學 2019
[2]特異性識別Cry1Ab多肽分子元件的構(gòu)建及其在電化學免疫傳感器的初步應用研究[D]. 陸欣.南昌大學 2018
[3]玉米赤霉烯酮膠體金免疫層析試紙條的研制[D]. 趙紅艷.南京農(nóng)業(yè)大學 2015
[4]赭曲霉毒素A模擬表位二級庫的構(gòu)建及其全抗原的生物合成[D]. 賀貞云.南昌大學 2014



本文編號：3694772