食物過敏作為一類食源性疾病在全球引起了廣泛關(guān)注,甲殼類水產(chǎn)品是聯(lián)合國糧農(nóng)組織公布的八大類過敏食物之一。中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）又名河蟹,是我國重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一,因其滋鮮味美,營養(yǎng)品質(zhì)高,廣受消費(fèi)者的喜愛。近年來,隨著河蟹產(chǎn)量和消費(fèi)量的增長,因食用河蟹引起的過敏案例也日益增多,影響著河蟹的食用安全性及人們的身體健康。國內(nèi)外研究表明,原肌球蛋白（tropomyosin,TM）是河蟹的主要過敏原。目前國內(nèi)外對于河蟹TM的研究多集中在提取純化及免疫學(xué)方面。因此,研究能夠降低河蟹致敏性的不同加工處理方式具有重要意義。本文以中華絨螯蟹為原料,首先通過等電點(diǎn)沉淀、硫酸銨鹽析等方法從蟹肉中得到純化TM,純化的過敏蛋白經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS–PAGE）和免疫印跡（Western blotting）分析與鑒定。接著,采用不同加工方式（蒸煮、反壓蒸煮、高溫高壓、微波、超高壓、超聲波、超聲波結(jié)合蒸煮等）對蟹肉進(jìn)行處理,參照美國藥典中模擬胃、腸液消化實(shí)驗方法,對處理后蟹肉的TM粗蛋白進(jìn)行消化,通過凝膠電泳、免疫印跡和抑制性酶聯(lián)免疫吸附測定（Inhibitio... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

第三章結(jié)果與分析18第三章結(jié)果與分析3.1TM的過敏原性質(zhì)TM的純化結(jié)果見圖3.1（箭頭所示為TM）。由圖可知，TM的分子量在38kDa左右（圖3.1A），且能與相應(yīng)的RabbitAnti–Tropomyosin1發(fā)生特異性免疫反應(yīng)（圖3.1B），這表明純化實(shí)驗所得蛋白確為TM。AB圖3.1純化河蟹TM的SDS–PAGE和westernblotting分析Fig3.1ThepureTMwasanalysisedbySDS–PAGEandwesternblottingM：蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)；A：純化TM的SDS–PAGE；B：純化TM的westernblotting3.1.1熱加工處理對TM消化穩(wěn)定性和致敏性的影響3.1.1.1TM粗蛋白的模擬胃液消化通過蒸煮、反壓蒸煮和高溫高壓加工方式處理蟹肉，并運(yùn)用模擬胃液消化技術(shù)消化其TM粗蛋白，消化結(jié)果見圖3.2。觀察圖片可以發(fā)現(xiàn)，通過胃蛋白酶的消化，在38kDa處的TM原始條帶都出現(xiàn)了一定的降解。整個實(shí)驗組中，TM和其它蛋白均隨著消化時間的增加而慢慢被降解。從圖3.2A和3.2B可發(fā)現(xiàn)，未處理與蒸煮處理在消化反應(yīng)進(jìn)行1min后，在34kDa處TM產(chǎn)生較為明顯的降解

第三章結(jié)果與分析20ABCDEF圖3.2不同處理的TM粗蛋白模擬胃液消化電泳圖Fig3.2SDS–PAGEofSGFdigestiononTMcrudeextractM：蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)；A：未處理；B：蒸煮20min處理；C：反壓蒸煮加工處理方法1；D：反壓蒸煮加工處理方法2；E：高溫高壓加工處理方法1；F：高溫高壓加工處理方法2為了更準(zhǔn)確的了解TM在胃蛋白酶消化實(shí)驗中的降解情況，采用靈敏度更高的westernblotting技術(shù)進(jìn)行分析。圖3.3為圖3.2的westernblotting分析圖譜，從凝膠電泳圖和免疫印跡圖上可以發(fā)現(xiàn)，TM的降解情況基本保持一致。未處理與蒸煮處理在胃蛋白酶消化至1min時，均可檢測到34kDa處的降解條帶，消化反應(yīng)進(jìn)行到60min時，二者的TM原始條帶均完全降解，但其降解條帶仍然存在。從圖3.3C、D、E、F中可以看到，經(jīng)反壓蒸煮與高溫高壓處理的蟹肉TM

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蟹類主要過敏原及其消減技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 林薇,許素玲,周瓊艷,朱小霞,李玲芝.  中國食品衛(wèi)生雜志. 2019(03)
[2]食物過敏原檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 王雅清,倪皓潔,李華韜,潘童,楊仁迪,傅玲琳,王彥波.  食品工業(yè)科技. 2019(13)
[3]60Co-γ輻照對豬血清白蛋白免疫原性及構(gòu)象的影響[J]. 王瑋,朱旭東,梁麗姣,舒蕊華,范巧君.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(03)
[4]水產(chǎn)品過敏原消減技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 費(fèi)丹霞,徐贊美,肖宇,趙勇娟.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報. 2018(08)
[5]水產(chǎn)品中主要過敏原的研究與展望[J]. 李風(fēng)鈴,李沂光,孫天樂,江艷華,姚琳,張亞南,翟毓秀.  中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn). 2018(01)
[6]熱加工對乳清中主要過敏原潛在致敏性的影響[J]. 費(fèi)爽雯,白浩,李欣,曾弘華,陳紅兵,李守明.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報. 2017(04)
[7]溫壓結(jié)合的超高壓技術(shù)對蝦原肌球蛋白抗原性與結(jié)構(gòu)的影響[J]. 韓建勛,陳穎,吳亞君,黃文勝,葛毅強(qiáng).  光譜學(xué)與光譜分析. 2017(02)
[8]超高壓結(jié)合酶法消減南美白對蝦蝦仁的致敏性[J]. 賈瑩,胡志和.  食品科學(xué). 2016(24)
[9]還原協(xié)同加熱處理對花生過敏原Ara h2結(jié)構(gòu)及抗原性的影響[J]. 李坤,連君,朱瑾,曾辛,陳紅兵,吳志華.  食品科學(xué). 2017(11)
[10]城市0～24月齡嬰幼兒過敏性疾病癥狀流行病學(xué)調(diào)查[J]. 王碩,蔣競雄,王燕,王姿歡,王婷,王惠珊.  中國兒童保健雜志. 2016(02)

博士論文
[1]蝦（Penaeus Vannamei）過敏原免疫活性的研究[D]. 李振興.中國海洋大學(xué) 2006

碩士論文
[1]中國對蝦（Penaeus chinensis）原肌球蛋白抗原表位和關(guān)鍵氨基酸的篩選及糖基化對其過敏原性的影響[D]. 王金寶.浙江工商大學(xué) 2018
[2]章魚過敏原的研究[D]. 沈海旺.集美大學(xué) 2012
[3]擬穴青蟹過敏原的性質(zhì)研究[D]. 余惠琳.集美大學(xué) 2011



本文編號：3549530