金針菇（Flammulina velutipes）富含多糖、蛋白質(zhì)、礦質(zhì)元素、維生素等多種營養(yǎng)成分,具有免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、降膽固醇、抗腫瘤等生物活性。本課題利用Plackett-Burman designs（PB）和響應(yīng)面分析（Response surface methodology,RSM）設(shè)計(jì)優(yōu)化了金針菇多糖（F.velutipes polysaccharides,FPS）的提取條件,經(jīng)硫酸酯化修飾后得到硫酸酯化FPS（Sulfated FPS,SFPS）,分析了SFPS和FPS的結(jié)構(gòu)及體外抗氧化能力,檢測了SFPS在D-半乳糖（D-galactose,D-gal）誘導(dǎo)的衰老模型小鼠中抗衰老和器官保護(hù)作用。主要結(jié)果如下:（1）FPS提取條件優(yōu)化。在提取溫度86.77℃,提取時(shí)間2.30h和乙醇倍數(shù)3.40條件下,FPS的理論得率為3.69%。為操作方便,提取條件設(shè)定為提取溫度為87℃,提取時(shí)間2.5h和乙醇倍數(shù)3倍,FPS的理論得率為3.64%,實(shí)際驗(yàn)證得率為3.55±0.12%。（2）SFPS和FPS的結(jié)構(gòu)分析。高效凝膠滲透色譜（High performance gel perm... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文17子水中，4℃透析過夜，次日更換去離子水，透析3-4d，最后經(jīng)濃縮和真空冷凍干燥得到純化的FPS。2.4.5FPS的硫酸酯化修飾硫酸酯化金針菇子實(shí)體多糖采用氯磺酸-吡啶法（趙冠華等，2017）進(jìn)行制備。首先在燒瓶中加入120mL吡啶，冰水浴中攪拌均勻，在80min內(nèi)將20mL氯磺酸緩慢逐滴加入，提前制得酯化試劑以備下一步試驗(yàn)。酯化過程：將4g純化好的金針菇子實(shí)體多糖溶解于80mL的N,N-二甲基甲酰胺中，充分?jǐn)嚢韬缶徛尤氲绞⒂絮セ噭┑臒恐小?0℃水浴，攪拌2h。待反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用20%的氫氧化鈉溶液調(diào)至pH中性，之后將其與95%乙醇以體積比為1:3的比例混合，4℃醇沉過夜，后經(jīng)5000r/min離心10min，收集沉淀。將沉淀溶于適量的去離子水中，透析4-5d，最后將多糖溶液真空冷凍干燥得到硫酸酯化金針菇子實(shí)體多糖（SulfatedF.velutipespolysaccharides，SFPS）。2.4.6SFPS取代度的測定多糖中硫酸根含量的測定采用氯化鋇-明膠法（Wangetal.,1999）。首先配制8%的三氯乙酸溶液，0.5%的氯化鋇-明膠溶液和0.6mg/mL的硫酸基標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。硫酸根標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別吸取0.02mL、0.06mL、0.10mL、0.14mL、0.18mL、0.20mL硫酸基標(biāo)準(zhǔn)液于試管中，加入1mol/LHCl補(bǔ)足至0.5mL，然后加入3.5mLTCA（8%）和1.0mL氯化鋇-明膠溶液，充分混合，室溫靜置20min，在波長360nm下測定吸光值A(chǔ)1，同樣取6支試管，將上述1mL氯化鋇-明膠溶液替換成1mL明膠溶液，其它步驟同上，測得吸光值A(chǔ)2，以A1-A2值為縱坐標(biāo)，硫酸基含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖2，回歸方程y=0.001x+0.0047，R2=0.9964，該標(biāo)準(zhǔn)曲線符合要求。圖2硫含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2ThestandcurveofSO42-

硫酸酯化金針菇多糖的抗氧化、抗衰老活性分析26重要參數(shù)，其次是乙醇倍數(shù)和提取時(shí)間。在本課題中，優(yōu)化的目的是找到能夠提供FPS最大提取率的條件。回歸模型的三維響應(yīng)面用于解釋自變量的影響和自變量之間對響應(yīng)變量的交互影響。在本研究中響應(yīng)曲面圖和等高線圖是使用DesignExpert7.0軟件處理得到如圖3至圖5所示。圖3提取時(shí)間與提取溫度對于FPS提取率交互作用影響的響應(yīng)面圖（A）和等高線圖（B）Fig.3Responsesurfaceplot(A)andcontourplot(B)oftheeffectofextractiontimeandextractiontemperatureonFPSextractionyield圖3反映了提取溫度與提取時(shí)間之間的交互作用。由方差分析表的P值（P=0.1719）分析得出提取溫度和提取時(shí)間之間的交互作用較弱，提取時(shí)間對應(yīng)的曲面平緩，當(dāng)把提取時(shí)間固定在2h時(shí)，隨著提取溫度的增加，在75~95℃范圍內(nèi)多糖提取率呈現(xiàn)出先增加后減少的趨勢，在87℃左右達(dá)到最大值。通常較高的提取溫度和較長的提取時(shí)間可以提高子實(shí)體多糖得率。然而，分析原因可能是提取溫度太高可能導(dǎo)致多糖的結(jié)構(gòu)破壞，過長的提取時(shí)間可能使子實(shí)體中其它成分析出，從而降低多糖得率。圖4乙醇倍數(shù)與提取溫度對于FPS提取率交互作用影響的響應(yīng)面圖（A）和等高線圖（B）Fig.4Responsesurfaceplot(A)andcontourplot(B)oftheeffectofmultipleofethanolandextractiontemperatureonFPSextractionyield圖4反映了提取溫度與乙醇倍數(shù)的交互作用對于FPS的提取得率沒有顯著影響（P=0.2172），在提取溫度75℃到85℃左右，乙醇倍數(shù)為2到3.5倍時(shí)，子實(shí)體多糖得率增加，但提取溫度超過85℃、乙醇倍數(shù)超過3.5倍時(shí)，多糖得率沒有進(jìn)一步提高。提


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