靈芝作為國(guó)家藥食同源的重要資源,且屬于“十大皖藥”之一,因其抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用而被用作健康促進(jìn)劑。本論文以靈芝為材料,探究靈芝酸A誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡機(jī)理以及靈芝酸A對(duì)小鼠抗腫瘤作用。最后,利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù),從m RNA水平明確靈芝酸A作用對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的調(diào)控。研究結(jié)果明確了靈芝酸A的抗癌機(jī)制,為把靈芝開發(fā)為特殊醫(yī)學(xué)食品建立了基礎(chǔ)。靈芝酸A誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡及其機(jī)理。以標(biāo)準(zhǔn)的靈芝酸A處理宮頸癌Hela細(xì)胞,靈芝酸A能顯著抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖,24h的IC₅₀為39.8μM。靈芝酸A阻滯細(xì)胞周期在G2/M期,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。經(jīng)過靈芝酸A處理后,可知與細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)量發(fā)生改變,cdk1、chk2、cdc2和Cyclin B的表達(dá)量降低,cdc25、p53和p21的表達(dá)量上升。同時(shí)靈芝酸A調(diào)控死亡受體通路和線粒體等相關(guān)通路的基因表達(dá)引起Hela細(xì)胞的凋亡,靈芝酸A處理后上述通路中的Bax、Bak、Bim、Caspase-9、Caspase-3、TNF-R1、Caspase-8、p21、PUMA、cytc、p-Akt、PARP、Ap... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

靈芝Fig1.1Ganodermalucidum

第2章靈芝酸A誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡及其機(jī)理20鮮稀釋ProteinaseK37℃消化5min后，用0.01MTBS洗滌。加入標(biāo)記緩沖液后再洗滌，用封閉液封閉，生物素化抗地高辛抗體，SABC一次處理后,進(jìn)行DAB顯色和蘇木素復(fù)染。脫水，透明，封片后顯微鏡觀察。2.1.9統(tǒng)計(jì)與分析通過使用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有的數(shù)據(jù)都表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）（n≥3）。單因素分析（ANOVA）是利用Origin（Origin6.0）軟件分析數(shù)據(jù)顯著性水平p<0.05。2.2結(jié)果與分析2.2.1靈芝酸A對(duì)Hela細(xì)胞活力的作用圖2.1靈芝酸A對(duì)Hela細(xì)胞活力的作用Fig2.1EffectofGanodermaacidAonHeLacellviability通過不同濃度的靈芝酸A（0，10，20，30，40，50，60，70，80μM）處理Hela24h，結(jié)果表明靈芝酸A對(duì)Hela細(xì)胞活力抑制作用十分明顯（圖2.1）。并且靈芝酸A對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用呈濃度依賴性方式，不斷增強(qiáng)。當(dāng)處理Hela細(xì)胞24h時(shí)，20μM、40μM、60μM的靈芝酸A對(duì)Hela細(xì)胞的抑制率分別達(dá)到了21.44%、50.08%、75.52%。24h的半抑制濃度(IC50)為39.8μM。2.2.2靈芝酸A對(duì)Hela細(xì)胞形態(tài)的作用為了探究靈芝酸A對(duì)Hela增殖的作用，在倒置的光學(xué)顯微鏡下，通過不同濃度的靈芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)處理細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)的改變(圖2.2)。經(jīng)過靈芝酸A作用24h后，Hela細(xì)胞數(shù)目顯著減少，形態(tài)也發(fā)生了變化，可見多種的異常形態(tài)。在正常條件下，Hela細(xì)胞(空白對(duì)照組)呈現(xiàn)為貼附在培養(yǎng)皿底層的多邊形，而經(jīng)靈芝酸A處理后的細(xì)胞就出現(xiàn)不規(guī)則的多邊形形狀，細(xì)胞逐漸變圓變亮，排列十分松散，貼壁也變得松弛。

第2章靈芝酸A誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡及其機(jī)理21圖2.2靈芝酸A誘導(dǎo)Hela細(xì)胞形態(tài)變化Fig2.2MorphologicalchangesofHeLacellsinducedbyGanodermaacidA2.2.3靈芝酸A誘導(dǎo)Hela細(xì)胞周期停滯及機(jī)制用不同濃度的靈芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)處理Hela細(xì)胞24h，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，細(xì)胞周期以及各個(gè)階段的比例分布如圖2.3。與對(duì)照組相比，隨著靈芝酸A濃度的增加，細(xì)胞阻滯在G2/M期的比例也逐漸變大。正常Hela細(xì)胞(不經(jīng)藥物處理)在G2/M期的比例為22.7％，而20μM、40μM和60μM濃度的靈芝酸A處理細(xì)胞24h后，G2/M期的細(xì)胞所占比例分別為26.04％、30.72％、36.25%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明靈芝酸A可以誘導(dǎo)Hela細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。圖2.3靈芝酸A誘導(dǎo)Hela細(xì)胞周期阻滯及不同細(xì)胞階段的細(xì)胞百分比Fig2.3Cellpercentageindifferentcellcyclephases為了解靈芝酸A誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在G2/M階段的具體分子機(jī)制，通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)與周期相關(guān)基因的表達(dá)變化（圖2.4）。在真核細(xì)胞中，細(xì)胞分裂周期的進(jìn)程是由細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的順序激活所驅(qū)動(dòng)的。Cdk1激酶的活

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博士論文
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本文編號(hào)：3520178