靈芝作為國家藥食同源的重要資源,且屬于“十大皖藥”之一,因其抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用而被用作健康促進劑。本論文以靈芝為材料,探究靈芝酸A誘導人宮頸癌Hela細胞的凋亡機理以及靈芝酸A對小鼠抗腫瘤作用。最后,利用轉(zhuǎn)錄組學技術,從m RNA水平明確靈芝酸A作用對宮頸癌Hela細胞的調(diào)控。研究結(jié)果明確了靈芝酸A的抗癌機制,為把靈芝開發(fā)為特殊醫(yī)學食品建立了基礎。靈芝酸A誘導宮頸癌Hela細胞凋亡及其機理。以標準的靈芝酸A處理宮頸癌Hela細胞,靈芝酸A能顯著抑制宮頸癌Hela細胞的增殖,24h的IC₅₀為39.8μM。靈芝酸A阻滯細胞周期在G2/M期,誘導細胞凋亡。經(jīng)過靈芝酸A處理后,可知與細胞周期相關基因的表達量發(fā)生改變,cdk1、chk2、cdc2和Cyclin B的表達量降低,cdc25、p53和p21的表達量上升。同時靈芝酸A調(diào)控死亡受體通路和線粒體等相關通路的基因表達引起Hela細胞的凋亡,靈芝酸A處理后上述通路中的Bax、Bak、Bim、Caspase-9、Caspase-3、TNF-R1、Caspase-8、p21、PUMA、cytc、p-Akt、PARP、Ap... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

靈芝Fig1.1Ganodermalucidum

第2章靈芝酸A誘導宮頸癌HeLa細胞凋亡及其機理20鮮稀釋ProteinaseK37℃消化5min后，用0.01MTBS洗滌。加入標記緩沖液后再洗滌，用封閉液封閉，生物素化抗地高辛抗體，SABC一次處理后,進行DAB顯色和蘇木素復染。脫水，透明，封片后顯微鏡觀察。2.1.9統(tǒng)計與分析通過使用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計分析。所有的數(shù)據(jù)都表示為平均值±標準偏差（SD）（n≥3）。單因素分析（ANOVA）是利用Origin（Origin6.0）軟件分析數(shù)據(jù)顯著性水平p<0.05。2.2結(jié)果與分析2.2.1靈芝酸A對Hela細胞活力的作用圖2.1靈芝酸A對Hela細胞活力的作用Fig2.1EffectofGanodermaacidAonHeLacellviability通過不同濃度的靈芝酸A（0，10，20，30，40，50，60，70，80μM）處理Hela24h，結(jié)果表明靈芝酸A對Hela細胞活力抑制作用十分明顯（圖2.1）。并且靈芝酸A對細胞增殖的抑制作用呈濃度依賴性方式，不斷增強。當處理Hela細胞24h時，20μM、40μM、60μM的靈芝酸A對Hela細胞的抑制率分別達到了21.44%、50.08%、75.52%。24h的半抑制濃度(IC50)為39.8μM。2.2.2靈芝酸A對Hela細胞形態(tài)的作用為了探究靈芝酸A對Hela增殖的作用，在倒置的光學顯微鏡下，通過不同濃度的靈芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)處理細胞，觀察細胞形態(tài)的改變(圖2.2)。經(jīng)過靈芝酸A作用24h后，Hela細胞數(shù)目顯著減少，形態(tài)也發(fā)生了變化，可見多種的異常形態(tài)。在正常條件下，Hela細胞(空白對照組)呈現(xiàn)為貼附在培養(yǎng)皿底層的多邊形，而經(jīng)靈芝酸A處理后的細胞就出現(xiàn)不規(guī)則的多邊形形狀，細胞逐漸變圓變亮，排列十分松散，貼壁也變得松弛。

第2章靈芝酸A誘導宮頸癌HeLa細胞凋亡及其機理21圖2.2靈芝酸A誘導Hela細胞形態(tài)變化Fig2.2MorphologicalchangesofHeLacellsinducedbyGanodermaacidA2.2.3靈芝酸A誘導Hela細胞周期停滯及機制用不同濃度的靈芝酸A(0μM、20μM、40μM、60μM)處理Hela細胞24h，用流式細胞儀檢測細胞周期，細胞周期以及各個階段的比例分布如圖2.3。與對照組相比，隨著靈芝酸A濃度的增加，細胞阻滯在G2/M期的比例也逐漸變大。正常Hela細胞(不經(jīng)藥物處理)在G2/M期的比例為22.7％，而20μM、40μM和60μM濃度的靈芝酸A處理細胞24h后，G2/M期的細胞所占比例分別為26.04％、30.72％、36.25%。實驗結(jié)果表明靈芝酸A可以誘導Hela細胞周期阻滯在G2/M期。圖2.3靈芝酸A誘導Hela細胞周期阻滯及不同細胞階段的細胞百分比Fig2.3Cellpercentageindifferentcellcyclephases為了解靈芝酸A誘導細胞周期阻滯在G2/M階段的具體分子機制，通過實時定量PCR技術檢測與周期相關基因的表達變化（圖2.4）。在真核細胞中，細胞分裂周期的進程是由細胞周期蛋白依賴性激酶的順序激活所驅(qū)動的。Cdk1激酶的活

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本文編號：3520178