雞胚蛋含有豐富的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì),這對(duì)雞胚的正常生長發(fā)育具有重要意義。蛋清和蛋黃蛋白質(zhì)是雞胚發(fā)育過程中的主要蛋白質(zhì)來源。蛋白質(zhì)的功能和結(jié)構(gòu)往往受其翻譯后修飾的影響。磷酸化是調(diào)節(jié)生物功能最常見的翻譯后修飾,其可以參與細(xì)胞代謝,蛋白活性調(diào)控,信號(hào)傳導(dǎo)等。然而雞胚蛋孵化過程中存在哪些磷酸化的蛋白質(zhì),其磷酸化狀態(tài)如何變化,這些變化對(duì)雞胚產(chǎn)生哪些影響,目前仍不清楚。此外,蛋清和蛋黃中含有豐富的酶系,孵化可能促使內(nèi)源酶被激活,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)在內(nèi)源酶的酶解下產(chǎn)生一些具有生理活性的多肽,雞胚發(fā)育過程中蛋白質(zhì)會(huì)自動(dòng)降解形成哪些小分子肽以及這些小分子肽具有什么生物活性,目前鮮有報(bào)道。基于此,本研究以孵化第0 d和孵化第12 d的蛋清和蛋黃混合物為原材料,采用比較定量磷酸化組學(xué)的策略,利用固定化金屬螯合親和層析特異性富集樣品中的磷酸化肽段,并結(jié)合納升液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)富集到的磷酸化肽段進(jìn)行鑒定和定量分析,并選取磷酸化水平發(fā)生顯著變化的蛋白質(zhì),通過進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析以及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道來探討蛋白質(zhì)磷酸化狀態(tài)改變對(duì)雞胚發(fā)育的影響。此外,通過MALDI-TOF-MS/MS方法對(duì)不同孵化時(shí)期蛋清和蛋黃中... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TMT6標(biāo)中不同標(biāo)記試劑的同位素原子的位置(Chenetal2016)

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆學(xué)術(shù)學(xué)位碩士畢業(yè)論文20圖2-1雞蛋蛋白質(zhì)差異定量磷酸化組學(xué)分析流程圖Fig.2-1Flowchartforcomparativequantitativephosphoproteomicanalysisofthechickeneggprotein1.2.7數(shù)據(jù)庫搜索二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)使用Maxquant(v1.5.2.8)進(jìn)行檢索。檢索參數(shù)設(shè)置：數(shù)據(jù)庫為美國國立生物技術(shù)信息中心（NationalCenterforBiotechnologyInformation，NCBI）Gallusgallus（75142條序列），添加了反庫以計(jì)算隨機(jī)匹配造成的假陽性率（FDR），并且在數(shù)據(jù)庫中加入了常見的污染庫，用于消除鑒定結(jié)果中污染蛋白的影響；酶切方式設(shè)置為Trypsin/P；漏切位點(diǎn)數(shù)設(shè)為2；肽段最小長度設(shè)置為7個(gè)氨基酸殘基；肽段最大修飾數(shù)設(shè)為5；Firstsearch和Mainsearch的一級(jí)母離子質(zhì)量誤差容忍度分別設(shè)為20ppm和5ppm，二級(jí)碎片離子的質(zhì)量誤差容忍度為0.02Da。將半胱氨酸烷基化設(shè)置為固定修飾，可變修飾為甲硫氨酸的氧化，蛋白N端的乙�；�，絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化。定量方法設(shè)置為TMT-10plex，蛋白鑒定、PSM鑒定的FDR都設(shè)置為1%。

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆學(xué)術(shù)學(xué)位碩士畢業(yè)論文22符合實(shí)驗(yàn)要求。圖2-2B表示鑒定到的肽段長度分布，由圖可知肽段長度主要分布在7-20個(gè)氨基酸殘基之間。說明本實(shí)驗(yàn)鑒定到的肽段長度分布說明樣品經(jīng)胰蛋白酶酶解后達(dá)到質(zhì)譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，符合質(zhì)量控制要求。圖2-2質(zhì)譜數(shù)據(jù)的質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果。(A)鑒定肽段的質(zhì)量偏移分布。(B)鑒定肽段的長度分布。Fig.2-2Qualitycontroltestresultsofmassspectrometrydata.(A)Identifiedpeptidemasstolerancedistribution.(B)Peptidelengthdistribution.2.2樣品重復(fù)性檢驗(yàn)圖2-3樣品重復(fù)性檢驗(yàn)Fig.2-3Repeatabilitytestbetweensamples本次實(shí)驗(yàn)我們采用了3次技術(shù)重復(fù)，利用3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)值計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)偏差系數(shù)（RSD）并繪制箱圖，用于檢驗(yàn)技術(shù)重復(fù)樣本的定量結(jié)果是否符合統(tǒng)計(jì)學(xué)上的一致

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞蛋清磷酸化蛋白質(zhì)組鑒定與分析[J]. 楊燃,宋洪波,黃群,劉麗莉,邱寧,馬美湖.  食品科學(xué). 2019(11)
[2]孵化期間雞胚及蛋內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)變化規(guī)律[J]. 張圓圓,李鋒,王連生,單安山.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(03)

博士論文
[1]基于組學(xué)技術(shù)分析山羊乳與牛乳乳清蛋白與脂肪球膜蛋白組成及消化特性[D]. 孫玉雪.吉林大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3109448