本研究旨在建立禽組織(雞肌肉、雞腎臟、雞肝臟、鴨肌肉、鵝肌肉)、禽蛋(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋、鴿蛋和鵪鶉蛋)及豬肌肉中大觀霉素和林可霉素殘留的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)方法。本試驗(yàn)以京海黃雞、高郵鴨、揚(yáng)州鵝、家鴿、鵪鶉和三元(杜×長(zhǎng)×大)雜交豬為試驗(yàn)素材,采用加速溶劑萃取(ASE)技術(shù)提取目標(biāo)物,建立并優(yōu)化禽組織、禽蛋和豬肌肉中大觀霉素和林可霉素殘留同時(shí)檢測(cè)的GC-MS/MS檢測(cè)方法。其主要研究結(jié)果如下:1.優(yōu)化了大觀霉素和林可霉素與雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)衍生反應(yīng)的條件,即分別吸取1.0μg/mL大觀霉素和林可霉素各100μL,40℃氮吹至干,加入200μL BSTFA和100L乙腈于10mL離心管中,密封,置于75℃烘箱中反應(yīng)60 min,生成衍生產(chǎn)物大觀霉素-硅醚和林可霉素-硅醚(spectinomycin-TMS and lincomycin-TMS)。2.建立并優(yōu)化了利用加速溶劑萃取儀(ASE)同時(shí)提取禽組織、禽蛋及豬肌肉中大觀霉素和林可霉素殘留的方法。即在60℃C、1500 psi條件下,用正己烷脫脂,0.01M磷酸二氫鉀緩沖液(pH 4.0)提取禽組織、禽蛋及豬肌肉中大觀霉素和林可霉素殘留,靜態(tài)萃取5 min,萃取2次。該提取方法節(jié)省溶劑、樣品基質(zhì)影響小、萃取效率高、回收率高。3.建立并優(yōu)化了禽組織、禽蛋及豬肌肉中同時(shí)檢測(cè)大觀霉素和林可霉素殘留的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)方法。采用EI模式,全掃描(SCAN)定性,Auto SRM結(jié)合外標(biāo)法定量。結(jié)果顯示:在空白雞肌肉、鴨肌肉、鵝肌肉、豬肌肉中添加大觀霉素在定量限(LOQ)～600.0 μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)≥0.9992;空白雞肝臟、雞腎臟、禽蛋(全蛋、蛋清、蛋黃)中添加大觀霉素在LOQ～2000.0μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)≥0.9991�？瞻纂u肝臟中添加林可霉素在定量限(LOQ)～1000.0μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)為0.9994;在空白雞腎臟中添加林可霉素在LOQ～3000.0μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)為0.9995;空白雞肌肉、鴨肌肉、鵝肌肉、豬肌肉、禽蛋(全蛋、蛋清、蛋黃)中添加林可霉素在定量限(LOQ)～200.0 μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對(duì)的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)≥0.9992。當(dāng)大觀霉素、林可霉素在空白樣品中添加濃度分別為L(zhǎng)OQ、0.5 MRL、1.0 MRL和2.0 MRL時(shí),禽組織和豬肌肉中大觀霉素和林可霉素的添加回收率分別為79.72%～94.23%、78.86%～93.64%;日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.29%～5.45%、2.24%～4.89%;日間 RSD 分別為 3.46%～7.76%、2.55%～6.17%;檢測(cè)限(LOD)分別為 2.5～4.4μg/kg、3.1～6.0μg/kg(5/論3);定量限(LOQ)分別為5.7～8.7μg/kg、6.2～10.0μg/kg(S≥10)。禽蛋(全蛋、蛋清、蛋黃)中大觀霉素和林可霉素的添加回收率分別為80.37%～95.72%、80.01%～95.12%;日內(nèi) RSD 分別為 2.03%～5.23%、1.93%～5.99%;日間 RSD 分別為 2.23%～6.67%、3.05%～6.71%;LOD 分別為 2.3～4.0μg/kg、2.5～4.3 μg/kg(S/N≥3);LOQ 在 5.6-8.0μg/kg、5.9～9.5μg/kg(S/N≥10)。方法驗(yàn)證參數(shù)均滿足中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、EU和美國FDA獸藥殘留檢測(cè)的要求,定量準(zhǔn)確、快速、靈敏度高。
【學(xué)位單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：O657.63;TS207.3
【部分圖文】：

ｃ１８ｈ３４ｎ２〇６ｓ。該物質(zhì)為白色結(jié)晶性粉末，無臭，味苦，可溶于水、甲醇，在乙醇??中略溶。耐熱，性質(zhì)穩(wěn)定，ｐＫａ為７．６，?２０％的水溶液ｐＨ值為３．０？５．５。其結(jié)構(gòu)如??圖１－１所示。??Ｏ?Ｐ？ＨＩ?Ｉ?１?Ｃ?Ｈ??％＝?＾?Ｉ??ＨａＣ?ＭＯ—／—＾??圖１－１林可霉素結(jié)構(gòu)式??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｌｉｎｃｏｍｙｃｉｎ??１．２作用機(jī)理??林可霉素（ｌｉｎｃｏｍｙｃｉｎ）是由鏈霉菌產(chǎn)生的一種林可胺類堿性抗生素［２５］，該??藥對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌（如厭氧菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌）有效［２Ｗ７］，革蘭氏??陰性細(xì)菌（糞鏈球菌、酵母菌、某些梭狀芽胞桿菌等）均無效［２８］。作用機(jī)理是與??細(xì)菌的核蛋白體５０Ｓ亞基結(jié)合，抑制肽�；D(zhuǎn)移酶，阻礙了細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，??從而使其易被吞噬和殺滅［２９，３（）】。林可霉素對(duì)免疫系統(tǒng)有增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)的作用，可??增強(qiáng)多核型白細(xì)胞的吞噬和殺菌功能，改變細(xì)菌表面活性和抑制細(xì)菌毒素的產(chǎn)生。??口服或注射給藥林可霉素臨床不良反應(yīng)可累及全身各個(gè)系統(tǒng)，常見為胃腸道反應(yīng)??［１１］，另外有呼吸道感染［３１］、神經(jīng)系統(tǒng)損害［３２］、過敏性休克［３３］、甚至死亡［３４］。??１．３藥理作用及其耐藥性??林可霉素一般起抑菌作用

子式為ＣＩ４Ｈ２４Ｎ２０７，分子量為３３２．１５。常用其鹽酸鹽，為白色或類白色結(jié)晶性粉??末。易溶于水、丙二醇、Ｎ，Ｎ－二甲基乙酰胺，乙醇中極微溶，對(duì)熱不穩(wěn)定，ｐＫａ??為７￣７．８，１０％水溶液的ｐＨ值為３．８￣５．５，其結(jié)構(gòu)如圖１－２所示。??ＣＨ，??ＨＮＣＨａ?Ｏ??圖１－２大觀霉素結(jié)構(gòu)式??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｐｅｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ??

圖２－１ＢＳＴＦＡ用量對(duì)衍生反應(yīng)的影響（ｎ＝５）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＢＳＴＦＡ?ｕｓａｇｅ?ｏｎ?ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?（ｎ＝５）??由圖２－１可見，在一定范圍內(nèi)，隨著ＢＳＴＦＡ添加量的增加，衍生產(chǎn)物峰面??積也隨著增加，當(dāng)ＢＳＴＦＡ的添加量為２００?ｐＬ，衍生產(chǎn)物峰面積最大。即２００?ｎＬ??為最佳用量。??２５００００００?１??２０００００００?－??＾?Ｘ??ｉ?ｉ?ｉ??＜?１５００００００?－?ｆ’??？?ｌｏｏｏｏｏｏｏ?－?￣－＊■大觀霉素??奢?一＊ｒ－林可霉素??５００００００?－??０?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??５０?１００?１５０?２００?２５０?３００??乙腈加入量（ｐＬ）??圖２－２乙腈用量對(duì)衍生反應(yīng)的影響（ｎ＝５）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ?ｕｓａｇｅ?ｏｎ?ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?（ｎ＝５）??硅烷化衍生反應(yīng)需要添加非質(zhì)子化溶劑，如吡啶、乙腈、二甲亞砜、四氫呋??喃、Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰
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本文編號(hào)：2855853