內蒙古傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品馬奶酒,包含多種營養(yǎng)物質及豐富的乳酸菌資源,其中乳酸明串珠菌在代謝過程中可以合成甘露醇、細菌素、雙乙酰等多種有益的代謝產物,在醫(yī)藥工程與食品保鮮等方面的應用前景十分廣泛。本研究以內蒙古牧民自制的馬奶酒作為菌種來源,從中篩選得到的一株益生乳酸菌SMN2-1-2。通過生理生化鑒定初步判斷其為明串珠菌屬,采用16S rRNA進行分析,并構建系統(tǒng)發(fā)育樹,將菌株SMN2-1-2歸屬為乳酸明串珠菌(Leuconostoc lactis)。研究L.lactis SMN2-1-2體外生物學特性,結果表明菌株SMN2-1-2對膽鹽、低pH具有一定的耐受性,在經過胃蛋白酶、胰蛋白酶處理后仍具有一定活性。乳酸明串珠菌SMN2-1-2在pH 3.0的培養(yǎng)基中培養(yǎng),隨著培養(yǎng)時間延長菌株SMN2-1-2的數(shù)量大致呈下降趨勢,3h后存活率為92.12%。在豬膽鹽含量為0.3%的MRS培養(yǎng)基中,隨著菌株培養(yǎng)時間的增長,活菌數(shù)下降幅度不大,6h后L.lactis SMN2-1-2的存活率可達到75.86%。胃蛋白酶與胰蛋白酶的濃度會影響L.lactis SMN2-1-2的存活數(shù)量。胃蛋白酶濃度0 g/L時,乳酸明串珠菌活菌數(shù)達6.45x 10~7cfu/mL,在胃蛋白酶含量最高達到10 g/L時,乳酸明串珠菌活菌數(shù)為4.88x 10~7cfu/mL;不含胰蛋白酶時,L.lactis SMN2-1-2的數(shù)量可以達到6.66×10~7cfu/mL,胰蛋白酶為7 g/L時,活菌數(shù)迅速減少到0.48×10~7cfu/mL。L.lactis SMN2-1-2還有共凝集、自凝集的特性,在適宜條件下培養(yǎng)20h后,自凝集率達到了24.26%。對四種常見的細菌:大腸桿菌(G~-)、枯草芽孢桿菌(G~+)、金黃色葡萄球菌(G~+)、沙門氏菌(G~-)的凝集率分別為10.65%,28.94%,21.22%,16.61%。為了研究L.lactis SMN2-1-2的抑菌特性,獲得理想抑菌效果,首先對4種抑菌試驗供試菌(大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌)進行了篩選,根據(jù)抑菌效果最終選擇枯草芽孢桿菌作為試驗對象進行后續(xù)試驗。通過Plackett-Burman設計篩選主要影響因素,利用響應面法優(yōu)化培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件,優(yōu)化的抑菌培養(yǎng)基配方為:蒸餾水1 L,CH_3COONa 3.95g/L,吐溫80為1mL/L,MnSO_4 0.05g/L,蔗糖為24.84g/L,C_6H_(17)N_3O_7 2g/L,牛肉粉5g/L,K_2HPO_4 2g/L,MgSO_4 0.2g/L,蛋白胨12.72g/L。優(yōu)化后的L.lactis SMN2-1-2培養(yǎng)條件為將初始pH 6.8、培養(yǎng)溫度38℃、培養(yǎng)時間27h,此時抑菌效果最好。采用上述試驗得到的最適培養(yǎng)基成分及最佳培養(yǎng)條件進行驗證,發(fā)現(xiàn)L.lactis SMN2-1-2抑菌效果明顯提高,比未優(yōu)化前提高2.3倍。通過對L.lactis SMN2-1-2產生的抑菌物質進行分離純化,并初步研究該抑菌成分的理化性質。結果表明菌株L.lactis SMN2-1-2所產生的抑菌物質Bact.2-1-2對熱具有穩(wěn)定性,隨著溫度逐漸上升,Bact.2-1-2抑菌活性變化不明顯。Bact.2-1-2在pH為2.0-6.0內時具有抑菌活性,pH為7.0時抑菌物質失去活性。此外,抑菌物質Bact.2-1-2對蛋白酶K、胰蛋白酶敏感,對胃蛋白酶、木瓜蛋白酶不敏感。同時抑菌物質Bact.2-1-2對革蘭氏陰性菌(沙門氏菌、大腸桿菌)、革蘭氏陽性菌(枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌)均顯示出了不同程度的抑菌活性,是一種具有應用價值的類細菌素。
【學位單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TS261.1
【部分圖文】：

15圖 2-1 乳球菌鑒定Fig. 2-1 Identification of Lactococcus分離株經TPY培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后，進行圖 2-1 所示的運動性試驗產氣產酸試驗、6. 5%、3%NaCl試驗、過氧化氫酶試驗、15℃、pH6.5 生長等試驗，根據(jù)以上試驗結果確定菌株的歸屬。將確定參照文獻中特有的鑒定方法，通過糖酵解試驗來做出種的判定[菌糖發(fā)酵試驗試管進行滅菌處理，處理后在無菌操作臺上將 4 支試管分為兩糖發(fā)酵培養(yǎng)液，另外一組則加入葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)液，每組中均設接種菌株。置于 37℃震蕩培養(yǎng) 24h，觀察試管中的變化。將接入照試管進行比較，當試管中一直無氣泡產生時記錄為陰性，試管性。若培養(yǎng)液顏色發(fā)生變化，如變?yōu)辄S色為陽性；如果顏色未

分析析采用SPSS16.0，數(shù)據(jù)均用Mean±SD表示。采用MEGA5.0 建立系結果菌的分離與篩選 份取自不同牧民家庭的馬奶酒樣品中共分離得到 70 株菌，這些菌為陽性。通過過氧化氫酶試驗結果為陰性。而且可以在含CaCO3菌落周圍存在溶鈣環(huán)。在MRS固體培養(yǎng)基上表現(xiàn)為表面光滑、中表面粗糙無光澤、中央有凸起、邊緣不整齊幾種類型。因此初步革蘭氏染色結果如圖 2-2 所示。

C D從A到D試驗菌依次為：枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、大圖 2-3 乳酸菌SMN2-1-2 對不同細菌的抑菌效果ig. 2-3 Bacteriostatic effect of lactic SMN2-1-2 for different bacte理生化鑒定的乳酸菌進行生理生化試驗，本試驗中，對明串珠菌種株進行對照。生理生化試驗結果見表 2-3。表 2-3 菌株 SMN2-1-2生理生化特性le2-3 Physiological property and biochemical property of SMN2L.lactisJCM 6123SMN2-1-2 生化特性L. lactisJCM 6123+ + 過氧化氫酶 - - - 葡萄糖產酸 + + + 葡萄糖產氣 + - - 精氨酸水解 - + + 七七苷水解 - - - 葡聚糖生成 -
【參考文獻】

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本文編號：2851673