臘八蒜黃色素作為一種天然的黃色素具有很大的應用潛力,近年來對臘八蒜黃色素的形成進行了初步探索,但其形成途徑和結構仍屬于推測階段。研究臘八蒜黃色素的結構,揭示其穩(wěn)定性和細胞轉運機制對于臘八蒜黃色素的加工利用具有重要意義。本課題在前人的研究基礎上取得如下進展:(1)以黃色臘八蒜蒜泥為原料,通過溶劑浸提法提取臘八蒜黃色素,結合醇沉、萃取、柱層析技術去除雜質,并通過液相色譜進一步分離純化。采用紫外分光光度計和超高效液相色譜質譜技術(UHPLC-MS)進行鑒定分析。臘八蒜黃色素在440 nm處具有一個特征吸收峰,相對分子質量為228。(2)采用熱重分析法(TGA)、差式掃描量熱法(DSC)和體外消化模擬法揭示了臘八蒜黃色素的熱穩(wěn)定性和胃腸消化中的穩(wěn)定性。臘八蒜黃色素在T≤140℃和174℃≤T≤244℃存在兩次失重,其降解符合一級動力學。構建了黃色素降解動力學模型,能夠預測臘八蒜黃色素在不同時間和溫度的降解趨勢。臘八蒜黃色素在胃消化和腸消化中分別降解了14.82%和35.51%,黃色素在腸道環(huán)境中更不穩(wěn)定。(3)建立了Caco-2細胞模型,通過細胞形態(tài)學觀察、跨膜電阻值和熒光素鈉通量三個評價指標驗證細胞模型可用于轉運試驗。當臘八蒜黃色素濃度小于5 mg/mL時,黃色素對Caco-2細胞無毒性作用。進一步研究色素濃度、轉運方向、時間和抑制劑對臘八蒜黃色素轉運的影響。在試驗濃度和時間內,臘八蒜黃色素的累積轉運量與轉運濃度和時間成正比,轉運方式以被動轉運為主,其P_(app)(AP-BL)為1.30×10~-55 cm·s~(-1),說明其在體內吸收度良好。轉運過程中可能存在外排蛋白的介導,且受能量抑制劑影響,但不受到P-糖蛋白和多藥耐藥蛋白的介導。
【學位單位】：沈陽農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TS264.4
【部分圖文】：

圖 2-1 黃色蒜泥Fig. 2-1 Yellow crushed garlic提取 4~5）作為提取溶劑，料液比為 1:4（g/mL蒜泥殘渣后，旋轉蒸發(fā)得到濃縮后溶液。分離純化糖和蛋白溶液中添加乙醇至乙醇體積分數(shù)為 80%以均勻后靜置 30 min，12000 r/min 離心 20 濃縮備用。脫脂酸乙酯以 1：1（v/v）的比例在分液漏斗 3 次，以除去溶液中的脂溶性化合物。離純化臘八蒜黃色素吸附樹脂對臘八蒜黃色素進行分離純化。

0 5 10 15 200.00.51.01.52.00mmAU時間（min）440 nm圖 2-4 純化后臘八蒜黃色素的液相色譜圖iquid chromatogram of the yellow pigment after 構鑒定技術可以提供所測化合物的相對分子質量蒜黃色素的總離子流圖及相應色譜圖如圖離子流峰。臘八蒜黃色素的一級質譜圖29.0981 的分子離子峰，及其附近的同位。由于正離子模式，因此臘八蒜黃色素的H、O、N 組成的化合物，分子離子峰的索推測分子式為 C13H12N2O2。

圖 2-6 臘八蒜黃色素的一級質譜圖Fig. 2-6 Mass spectrum of the “Laba” yellow pigmentWang D 和 Hu D 等人通過使用吡咯基甘氨酸、吡咯基纈氨酸、吡咯基異亮氨酸基琥珀酸以及吡咯基戊二酸與丙酮酸反應可以制得黃色素，制得黃色素的相對分均高于本試驗鑒定出的黃色素相對分子質量，由此推測與本試驗中檢測到的不是臘八蒜黃色素。為進一步分析臘八蒜黃色素分子離子峰的結構，在正離子模式下，選擇準分子作為母離子，通過不斷增加碰撞能量加強氣體對正離子的碰撞速度，得到新的子片。圖 2-7 碰撞能量分別為 10 V、20 V、30 V 的二級質譜圖，圖中 m/z 229 為母離撞能量為 10 V 時出現(xiàn) m/z 183 的子碎片離子，丟失了質核比為 46 的基團，推測 183 的子碎片離子的分子式為[C12H11N2]+。當碰撞能量增加到 30 V 時，出現(xiàn)了新離子，其質核比分別為 168、142 和 115，斷裂方式分別為[M-C11H8N2]+、[M-C10H[M-C9H7]+。本文通過液質聯(lián)用技術鑒定了臘八蒜黃色素的相對分子質量及其碎，其結構式需要結合紅外光譜及核磁共振進一步表征。
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本文編號：2851398