赭曲霉毒素A是一種分布較廣的真菌毒素,主要污染谷物、動(dòng)物飼料和動(dòng)物性食品,具有較強(qiáng)的毒性和致癌、致畸、致突變的作用。目前關(guān)于赭曲霉毒素A的檢測(cè)方法有很多,但大都存在檢測(cè)成本高、儀器不便攜、不適用于即時(shí)檢測(cè)、樣品前處理復(fù)雜等問(wèn)題。雖然,紙層析檢測(cè)的成本相比較于儀器分析檢測(cè)的成本要低,但存在著試劑用量大、飽和層析時(shí)間長(zhǎng)、分子探針固定量比較少、多重檢測(cè)時(shí)分子量有限等不足。因此,開(kāi)發(fā)一種既具有紙層析檢測(cè)時(shí)的優(yōu)勢(shì)外還可以彌補(bǔ)其不足的替代物就顯得尤為重要。本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)室制備的微流控平臺(tái),采用自組裝方法制備得出不同粒徑的蛋白石光子晶體微球。自主設(shè)計(jì)了 4種不同形狀的玻璃毛細(xì)管分別與蛋白石光子晶體微球相結(jié)合的微器件,利用毛細(xì)作用,形成自動(dòng)進(jìn)樣與檢測(cè)的一體化設(shè)計(jì)。首先對(duì)于微球的制備采用實(shí)驗(yàn)室原先探索出的改進(jìn)的Stober方法,利用油相與水相流速的不同可以制備出不同粒徑的微球,最終得到當(dāng)油相流速為10 mL/h水相流速為35 mL/h時(shí)放入內(nèi)徑為0.5 mm的玻璃毛細(xì)管中最為合適。其次將微球與4種不同形狀的玻璃毛細(xì)管相結(jié)合形成4種不同的微器件,利用金相顯微鏡對(duì)其表征,就進(jìn)樣時(shí)間、進(jìn)樣量等對(duì)其進(jìn)行了分析,篩選出兩種微器件進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。最后本文還對(duì)蛋白石光子晶體微球毛細(xì)管器件制備過(guò)程中最適的條件進(jìn)行探索以及影響微球熒光信號(hào)的干擾因素進(jìn)行分析。本文建立了基于蛋白石光子晶體微球的毛細(xì)管器件的制備與結(jié)合核酸適配體熒光檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行赭曲霉毒素A的定性、定量檢測(cè)的方法。將制備得到的光子晶體微球進(jìn)行表面化學(xué)修飾連接相應(yīng)的功能性基團(tuán),并與已連接Cy3熒光基團(tuán)的核酸適配體進(jìn)行偶聯(lián),利用赭曲霉毒素A與核酸適配體相對(duì)應(yīng)的互補(bǔ)鏈一起競(jìng)爭(zhēng)適配體反應(yīng)所引起的熒光信號(hào)變化進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)過(guò)程中幾個(gè)關(guān)鍵條件進(jìn)行優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)得出:適配體最適濃度為600nmol/L,互補(bǔ)鏈最適濃度為15 μmol/L,反應(yīng)最適溫度為45℃C,反應(yīng)時(shí)間為1.5 h。分別得出了蛋白石光子晶體微球毛細(xì)管器件1的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y=-7.775471gX+70.59418,R2=0.99517,最低檢測(cè)限為 0.4 ng/mL,其線性檢測(cè)范圍:1 ng/mL-100 ng/mL。蛋白石光子晶體微球毛細(xì)管器件2的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=-7.022061gX+71.77908,R2=0.99256,最低檢測(cè)限為 0.1 ng/mL,其線性檢測(cè)范圍:1 ng/mL-100 ng/mL。并檢測(cè)了兩種器件的特異性,結(jié)果表明本器件具有特異性,與赭曲霉毒素B、黃曲霉毒素A1、伏馬毒素B1、玉米赤霉烯酮毒素?zé)o明顯交叉反應(yīng)。之后,我們又與傳統(tǒng)的ELISA作了對(duì)比分析,分別檢測(cè)了大米、小麥、玉米這三種谷物中OTA的加標(biāo)回收率,蛋白石光子晶體微球細(xì)細(xì)管器件1的總體回收率為59.99±8.64%～78.74±8.64%,蛋白石光子晶體微球毛細(xì)管器件2的總體回收率為84.95±10.31%～108.11±7.00%,從回收率可以看出器件2相較于器件1而言更具有優(yōu)勢(shì)。
【學(xué)位單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS207.4
【部分圖文】：

圖１．２不同維度的光子晶體１６４）逡逑

Ｓｉ（ＯＲ）４邋＋邋４Ｈ２０邋Ｓｉ（ＯＨ＼邋－ｆ邋＼ＲＯＨ逡逑ｎＳｉ（ＯＨ＼邋－＞邋ｎＳｉ０２邋＋邋２ｎＨ２0逡逑傳統(tǒng)Ｓｔ６ｂｅｒ法制備流程如圖１．３所示一般先將氨水、水和乙醇放置于磁力攪逡逑拌器上進(jìn)性混勻，混勻后繼續(xù)攪拌，反應(yīng)２ｈ后，離心并清洗混合液，從而得到逡逑ＳｉＣｈ微球反應(yīng)的具體過(guò)程為：ＴＥＯＳ首先水解生成Ｓｉ（ＯＨ）４單體，然后縮合逡逑成可溶性縮合物。在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下，可溶性縮合物之間會(huì)相互團(tuán)聚，進(jìn)一步逡逑縮合為不穩(wěn)定的微晶核。與此同時(shí)，可溶性的縮合物還可在大顆粒的表面進(jìn)行生逡逑長(zhǎng)，而體積較大的微晶核可以進(jìn)一步團(tuán)聚形成更大顆粒。逡逑Ａ逡逑堿，液邐口口口逡逑醇溶液邋／邐＼邋ＴＥＯＳ、醇溶液邋／邋＼邐石茲力彟邐／邋＼逡逑圖１．３（ａ）傳統(tǒng)Ｓｔ６ｂｅｒ法制備反應(yīng)流程圖逡逑Ｆｉｇ．邋１．３（ａ）邋Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ邋Ｓｔ６ｂｅｒ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｆｌｏｗ邋ｃｈａｒｔ逡逑１０逡逑

Ｓｉ（ＯＲ）４邋＋邋４Ｈ２０邋Ｓｉ（ＯＨ＼邋－ｆ邋＼ＲＯＨ逡逑ｎＳｉ（ＯＨ＼邋－＞邋ｎＳｉ０２邋＋邋２ｎＨ２0逡逑傳統(tǒng)Ｓｔ６ｂｅｒ法制備流程如圖１．３所示一般先將氨水、水和乙醇放置于磁力攪逡逑拌器上進(jìn)性混勻，混勻后繼續(xù)攪拌，反應(yīng)２ｈ后，離心并清洗混合液，從而得到逡逑ＳｉＣｈ微球反應(yīng)的具體過(guò)程為：ＴＥＯＳ首先水解生成Ｓｉ（ＯＨ）４單體，然后縮合逡逑成可溶性縮合物。在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下，可溶性縮合物之間會(huì)相互團(tuán)聚，進(jìn)一步逡逑縮合為不穩(wěn)定的微晶核。與此同時(shí)，可溶性的縮合物還可在大顆粒的表面進(jìn)行生逡逑長(zhǎng)，而體積較大的微晶核可以進(jìn)一步團(tuán)聚形成更大顆粒。逡逑Ａ逡逑堿，液邐口口口逡逑醇溶液邋／邐＼邋ＴＥＯＳ、醇溶液邋／邋＼邐石茲力彟邐／邋＼逡逑圖１．３（ａ）傳統(tǒng)Ｓｔ６ｂｅｒ法制備反應(yīng)流程圖逡逑Ｆｉｇ．邋１．３（ａ）邋Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ邋Ｓｔ６ｂｅｒ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｆｌｏｗ邋ｃｈａｒｔ逡逑１０逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2833520