【摘要】：反棕櫚油酸是一種反芻動物代表性反式脂肪酸,它主要來源于反芻動物脂肪和乳制品當(dāng)中,在人體內(nèi)不能重頭合成,但可以由反異油酸內(nèi)源性生成。對于反棕櫚油酸的研究報道較少,近年來流行病學(xué)報道反式棕櫚油酸具有降低血脂的功能,還有報道反棕櫚油酸與心血管疾病發(fā)病率成反比。心血管疾病作為全球危害性最大的疾病之一,反棕櫚油酸是否會對預(yù)防心血管疾病有積極作用,這些現(xiàn)在都不清楚。只通過流行病學(xué)分析還不能確定其作用好壞。因此,通過具體實驗研究反棕櫚油酸與脂質(zhì)的關(guān)系很有研究意義。本實驗以肝細(xì)胞LO2細(xì)胞為實驗對象,通過加入不同濃度的反棕櫚油酸進(jìn)行作用,研究它對細(xì)胞脂肪酸組成的影響。研究反棕櫚油酸對油酸作用引起的高脂LO2細(xì)胞甘油三酯和膽固醇含量的影響,并觀察它對細(xì)胞脂質(zhì)氧化相關(guān)指標(biāo)的影響;另外使用脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究反棕櫚油酸對高脂LO2細(xì)胞脂質(zhì)組的影響,找到差異脂質(zhì);通過對AMPK通路上相關(guān)脂質(zhì)代謝蛋白測定進(jìn)一步闡明了反棕櫚油酸作用脂質(zhì)的機(jī)理。本實驗結(jié)果如下:1、通過測定細(xì)胞存活率、細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組成、脂質(zhì)含量變化以及細(xì)胞氧化情況來反應(yīng)反棕櫚油酸對脂質(zhì)代謝的作用。結(jié)果表明,反棕櫚油酸濃度在100μM以下無顯著毒性。100μM的9t16:1作用肝細(xì)胞后飽和脂肪酸降低了34.89%,單不飽和脂肪酸升高了16.44%,多不飽和脂肪酸升高了30.50%;9t16:1在肝細(xì)胞內(nèi)部分生物轉(zhuǎn)化為11t18:1和CLA,其轉(zhuǎn)化率分別為17.50%和16.42%;9t16:1顯著降低脂肪變性肝細(xì)胞甘油三酯和膽固醇含量,降低率分別為61.76%和37.80%;此外9t16:1顯著升高肝細(xì)胞MDA水平(升高率為45.36%)和降低SOD活性(降低74.42%)。2、通過提取細(xì)胞內(nèi)總脂質(zhì)并用高效液質(zhì)對總脂質(zhì)進(jìn)行分離鑒定,然后比較組間差異得到油酸組與對照組,油酸、反棕櫚油酸混合組與油酸組的脂質(zhì)代謝產(chǎn)物有顯著差異,通過PCA總得分圖和偏最小二乘法PLS-DA進(jìn)行多遠(yuǎn)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)加入油酸和反棕櫚油酸后作用效果顯著。根據(jù)離子峰強(qiáng)度篩選出差異代謝脂質(zhì),兩組總共篩選出100種有顯著性差異脂質(zhì),其中甘油磷脂占多數(shù)。通過火山圖和層次聚類分析可以清楚看出上調(diào)或下調(diào)脂質(zhì)。例如與對照組相比,OA組中上調(diào)的脂質(zhì)有二元醇磷脂酰乙醇胺、1,2-二醇基-sn-甘油-3-磷酸-N,N-二甲基乙醇胺、1,2-二醇基-sn-甘油-3-磷酸-l-絲氨酸、1,2-二醇基-sn-甘油等,而OA組中下調(diào)的脂質(zhì)有神經(jīng)酰胺(d18:1/16:0)、1-(1Z六烯基)-2-(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z二十二碳六烯基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1-棕櫚酰-2-棕櫚酰-sn-甘油、1-硬脂酰-2-棕櫚酰-sn-甘油等。與油酸組比,反棕櫚油酸與油酸混合組中上調(diào)的脂質(zhì)有1-十六酰-2-(9Z,12Z十八二烯基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、(2R)-3-[(2-氨基乙氧基)(羥基)磷酸]氧基-2-[(9Z)-9-六癸氧基]丙基(9Z)-9-六癸酸鹽、(19R)-25-氨基-22-羥基-22-氧代-16-氧代-17,21,23-三氧雜-22λ~5~-磷五碳-19-基(9Z,12Z,15Z)-9,12,15-十八碳三酸酯、1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺等,而下調(diào)的脂質(zhì)有1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、正十六烷酰亞胺、1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、(2R)-3-[(2-氨基乙氧基)(羥基)磷酸]氧基-2-(十四酰氧基)棕櫚酸丙酯等。并且將差異脂質(zhì)通過KEGG網(wǎng)站進(jìn)行分析得出了可能的相關(guān)代謝通路AMPK信號通路。3、通過Western Blot實驗研究反棕櫚油酸對AMPK信號通路的影響,結(jié)果表明反棕櫚油酸會引起AMPKα表達(dá)升高,從而激活A(yù)MPKα下游各種與脂質(zhì)代謝有關(guān)蛋白。其中,脂質(zhì)合成相關(guān)蛋白ACC、FAS活性受到抑制,而PGC1、CPT1A和PPARα活性增加。說明反棕櫚油酸可激活高脂LO2細(xì)胞內(nèi)AMPK通路,進(jìn)行脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS201.4
【圖文】：

加入 200 μL PBS 于 488 nm 激發(fā)波長、525 n 相對含量（%）=實驗組 OD/對照組[63]。理以±s 表示，采用 SPSS 統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，不同（ANOVA），所有實驗至少有三個平行，P<0.酸對 LO2 細(xì)胞存活率的影響的是不同濃度反棕櫚油酸對 LO2 細(xì)胞活力的影響一定濃度范圍內(nèi)（5、25、50、100 μM）反棕櫚但是當(dāng)反棕櫚油酸濃度提高到 200 μM 時，細(xì)胞）。說明反棕櫚油酸濃度在 100 μM 以內(nèi)對 LO2度大于 200 μM 后會對細(xì)胞造成損傷。

14油酸對脂肪變性 LO2 細(xì)胞脂質(zhì)含量的影響紅O 染色觀察反棕櫚油酸對脂肪變性 LO2 細(xì)胞脂質(zhì)油酸造模組紅色脂滴數(shù)量多且明顯，對照組無紅色組紅色脂滴明顯，但 25、50、100 μM 組脂滴較油酸酸對脂肪變性LO2細(xì)胞中甘油三酯和膽固醇含量的酸后細(xì)胞內(nèi)甘油三酯顯著上升，但與單獨油酸作用合組隨著反棕櫚油酸的加入甘油三酯的含量顯著下圖 2.2B 不同濃度油酸對 LO2 細(xì)胞甘油三酯的影響Fig 2.2B Effects of Different Concentrations of OleicAcid on Triglycerides in LO2 Cells

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本文編號：2731048