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福建水仙茶兩種黃酮糖苷的分離鑒定及其抑制口腔致病菌功能的研究

發(fā)布時間:2020-06-23 16:46
【摘要】:福建水仙茶暢銷于閩西、廣東及東南亞國家和地區(qū),具有健齒提神、助消化、降膽固醇等功能。福建水仙茶含多種活性成分,主要為黃酮類化合物。本文以福建水仙茶為原料,分離了兩種新型黃酮糖苷化合物并進(jìn)行鑒定;比較了兩種化合物在不同產(chǎn)地、不同季節(jié)水仙茶中的含量差異;并研究兩種化合物對口腔致病菌的抑制作用及機(jī)制,研究結(jié)果可為尋找天然抗菌劑提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1、采用AB-8型大孔樹脂進(jìn)行分離純化,乙醇梯度洗脫,流速1.5 BV/h,收集80%乙醇洗脫部分,旋干后得到半制備樣品;半制備液相色譜分離條件為:0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈流動相梯度洗脫,一次上樣量100 mg,流速10 mL/min,二次制備后兩種黃酮糖苷純度分別達(dá)到98.77%和97.08%,命名為F1和F2;利用質(zhì)譜和核磁共振波譜等現(xiàn)代技術(shù)手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,F1和F2分別是Quercetin3-O-[(E)-p-coumaroyl-(1→2)][α-L-arabinopyranosyl-(1→3)][β-D-glucopyr anosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-D-glucopyranoside)和 Kaempferol 3-O-[(E)-p-coumaroyl-(1→2)][α-L-arabinopyranosyl-(1→3)][β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-L-rhamnopyranosyl(1 →6)]-β-D-glucopyranoside。2、通過建立用于分析福建水仙茶中黃酮類化合物的UPLC方法對不同產(chǎn)地、不同季節(jié)的水仙茶中的F1 和F2進(jìn)行含量測定,結(jié)果表明,建甌、武夷、漳平、閩南四個產(chǎn)地的水仙茶中建甌水仙的F1含量最高,為1.3 mg/g,武夷水仙的F2含量最高,為0.85 mg/g;四個產(chǎn)地的水仙茶中的F1含量均高于F2;福建水仙茶中的F1含量隨著生長時期呈升高趨勢,在露季(初冬)達(dá)到最高,為1.25 mg/g,F2在一年四季內(nèi)的含量在0.5 mg/g上下波動。3、通過微量二倍稀釋法測定了 F1和F2對牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌的抑制作用,最低抑菌濃度在0.12-0.24 mM范圍內(nèi),顯示兩者對口腔致病菌均具有較強(qiáng)的抑制效果;用結(jié)晶紫染色法評估了 F1和F2對致病菌生物膜的抑制能力,結(jié)果表明兩者均劑量依賴性地減少細(xì)菌生物膜的形成,高濃度(0.24mM)作用下的生物膜被抑制70%;通過計算F1和F2的鐵螯合率,發(fā)現(xiàn)兩者在0.0075-0.06 mM范圍內(nèi)均具有較強(qiáng)的鐵載體活性,濃度在0.06 mM時鐵螯合率大于50%。結(jié)果表明F,和F2可以通過抑制細(xì)菌生長和生物膜形成及螯合鐵離子等途徑減少口腔疾病的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】:浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號】:TS272.55
【圖文】:

外形圖,水仙,茶樹,外形圖


1.1.1水仙茶樹形態(tài)特征及生物特性逡逑福建水仙茶為無性繁殖系品種,屬小喬木型,原產(chǎn)于建陽縣水吉的大湖,并逡逑逐步被外地引植。圖1.1為福建水仙外形圖,水仙茶樹樹勢高大,主干明顯,分逡逑技稀,葉片呈水平狀著生,葉片大而厚,色濃綠,葉柄粗扁,梗粗,節(jié)間長,芽逡逑葉含水量高。該品種育芽力和持嫩性較強(qiáng),一芽三葉盛期在4月下旬,萌芽開采逡逑期較遲;抗逆性較強(qiáng),扦插繁殖發(fā)根率較高,根系發(fā)徸,吸肥力強(qiáng),植株經(jīng)濟(jì)壽逡逑命長。多年來,生產(chǎn)者評價水仙品種好栽、好采、好制、適制性廣,茶產(chǎn)量高,逡逑平均可生產(chǎn)鳥龍茶150kg/667邋m2以上,且樹齡長。與其他烏龍茶品種相比,水仙逡逑的香氣物質(zhì)成分包括橙花叔醇,香葉醇、苯甲酸、3-已烯酯、醇-茉莉酮和P-紫羅逡逑蘭酮等含量均偏高。水仙的碳、氮代謝適中,雙糖、單糖含量較高。酯型兒茶素逡逑和非酯型兒茶素比值低

洗脫液,大孔樹脂,目標(biāo)化合物,峰面積


邐第二章兩種黃酮苷的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定逡逑并進(jìn)行UPLC檢測(圖2.4),經(jīng)濃縮干燥后得到洗脫產(chǎn)物902.6邋mg。逡逑6.0n邐p逡逑r邋AT逡逑0.0J ̄ ̄f邐¥邐f邐邐1邐1邐1邐1邐1邐—逡逑1邐2邐3邐4邐5邐6邐7邐8邐9邐10邐11逡逑圖2.3大孔樹脂洗脫液中所含目標(biāo)化合物F,、?2的峰面積逡逑Fig.2.3邋Peak邋areas邋of邋target邋compounds邋in邋macroporous邋resin邋eluent逡逑注:1邋(60%洗脫液第1管);2邋(60%洗脫液第6管);3邋(60%洗脫液第11管):4邋(60%逡逑洗脫液第16管);5邋(60%洗脫液第21管);6邋(80%洗脫液第1管);7邋(80%洗睨液第6逡逑管);8邋(80°/。洗脫液第11管);9邋(80%洗脫液第16管);10邋(80%洗脫液第21管);11逡逑(80%洗脫液第26管)逡逑F,逡逑i逡逑二邐I逡逑二邐I邐(逡逑二邐!邐F逡逑1邋h邋丨邋i.逡逑:邐?fl邋!邋i邐f邋fi逡逑

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