條斑紫菜多糖的降解、分離純化及生物活性研究
發(fā)布時間:2020-06-24 20:12
【摘要】:條斑紫菜是一種分布在江蘇沿海地區(qū)的經(jīng)濟型褐藻,含有蛋白質(zhì)、多糖、維生素和礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分。研究表明條斑紫菜多糖具有抗炎癥、降血脂、抗腫瘤、提高免疫力、抗氧化等多種生物活性。本論文旨在為研發(fā)具有良好抗氧化、降血脂、提高免疫力活性的條斑紫菜多糖相關(guān)功能性食品提供理論依據(jù)。多糖的生物活性常與其空間結(jié)構(gòu)和分子量有關(guān),為了提高其生物活性,本文以條斑紫菜為原料采用水提醇沉法提取條斑紫菜粗多糖,用過氧化氫和抗壞血酸聯(lián)合的方法對條斑紫菜粗多糖進行降解,對降解多糖進行分離純化后再對純化的組分進行化學(xué)成分分析、結(jié)構(gòu)分析、體外免疫活性和體外抗氧化活性研究。主要研究結(jié)果如下:1.用水提醇沉法從條斑紫菜中提取條斑紫菜多糖(PSPY),提取率為9.7%。用過氧化氫-抗壞血酸聯(lián)合的方法對條斑紫菜多糖進行降解,經(jīng)單因素實驗和響應(yīng)面優(yōu)化,得出最優(yōu)的降解條件:降解劑濃度為4.1 mM、降解溫度為52.4℃、降解時間為2.1 h,降解多糖(DPSPY)的得率為73.89%。2.對PSPY和DPSPY進行化學(xué)成分分析,發(fā)現(xiàn)降解后多糖的總糖含量和硫酸基含量提高,蛋白質(zhì)含量降低,高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)測得降解前后多糖的峰位分子量分別為4.52×105和1.70×104。經(jīng)紅外光譜掃描分析后發(fā)現(xiàn)降解前后多糖的結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生明顯的改變。通過對PSPY和DPSPY的還原力、DPPH自由基的清除活性、·OH自由基的清除活性和O2-自由基的清除活性的研究發(fā)現(xiàn),DPSPY的還原力和三種自由基的清除活性顯著高于PSPY。以考來烯胺為陽性對照,纖維素為陰性對照,發(fā)現(xiàn)DPSPY對膽汁酸的結(jié)合能力強于PSPY。3.DPSPY 經(jīng) DEAE Cellulose-52 和 SephadexG-100 進行分離純化后得到 DPSPY-0、DPSPY-0.1M、DPSPY-0.3M 和 DPSPY-0.5M 四個組分,DPSPY-0、DPSPY-0.1M、DPSPY-0.3M 和 DPSPY-0.5M 的相對分子量分別為 1.08×104、1.07×104、1.87×104 和 3.55×104,總糖含量分別為 75.86%、78.40%、78.54%、79.20%,蛋白質(zhì)含量為 0.72%、未檢測出、0.24%和未檢測出,硫酸基含量為4.9%、16.93%、17.10%和17.76%。GC-MS分析發(fā)現(xiàn)各組分都主要是半乳糖組成,并含有少量的葡萄糖、甘露糖、木糖和鼠李糖組成。紫外-可見光全波段掃描可知DPSPY-0和DPSPY-0.3M含有少量的糖蛋白基本不含核酸及色素。DPSPY-0.1M和DPSPY-0.5M基本不含核酸、蛋白質(zhì)及色素。紅外光譜分析四種分離純化組分均具有多糖的特征吸收峰,均為吡喃糖。核磁共振光譜分析可知條斑紫菜降解多糖的四個分離純化組分均為同時存在α-型和β-型糖苷鍵的吡喃糖。4.利用細胞模型實驗比較了 PSPY、DPSPY、DPSPY-0、DPSPY-0.1M、DPSPY-0.3M 和 DPSPY-0.5M 的體外免疫活性。結(jié)果表明條斑紫菜多糖、降解多糖及其分離純化組分都具有一定的促進RAW264.7巨噬細胞增殖的作用,都具有增強RAW264.7巨噬細胞吞噬中興紅的能力,DPSPY和DPSPY-0.5M具有促進RAW264.7巨噬細胞分泌細胞因子NO的能力。5.鐵還原力和自由基(DPPH、·OH、O2-)清除實驗結(jié)果表明,四個純化組分中DPSPY-0的抗氧化活性最小,DPSPY-0.5M的抗氧化活性最強。各純化組分的抗氧化活性強弱順序與其硫酸基含量高低順序基本一致。
【學(xué)位授予單位】:浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號】:TS254.58
【圖文】:
浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文逡逑由圖2-1可以看出,在測量范圍內(nèi)(0?10mM)內(nèi),在H202-Vc的濃度0-4逡逑mM范圍內(nèi)降解多糖對DPPH自由基的清除率隨降解劑濃度的升高而不斷升高,逡逑從4邋mM以后隨著降解劑濃度的增加,降解后的多糖對DPPH的清除率不斷下降,逡逑這可能是由于H202-Vc的濃度增大會增加對多糖分子鏈的作用,當降解劑濃度逡逑超過4mM時降解程度增大,使大分子多糖降解為較小的碎片,而當分子減小到逡逑一定程度會降低其對DPPH自由基清除活性。因此H202-Vc的濃度選用4邋mM逡逑時進行以下兩項單因素實驗。逡逑2.3.1.2反應(yīng)溫度的影響逡逑52邋-逡逑::逡逑v溴危巍㈠義希椋簦媯媯殄義希潁澹澹義
本文編號:2728299
【學(xué)位授予單位】:浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號】:TS254.58
【圖文】:
浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文逡逑由圖2-1可以看出,在測量范圍內(nèi)(0?10mM)內(nèi),在H202-Vc的濃度0-4逡逑mM范圍內(nèi)降解多糖對DPPH自由基的清除率隨降解劑濃度的升高而不斷升高,逡逑從4邋mM以后隨著降解劑濃度的增加,降解后的多糖對DPPH的清除率不斷下降,逡逑這可能是由于H202-Vc的濃度增大會增加對多糖分子鏈的作用,當降解劑濃度逡逑超過4mM時降解程度增大,使大分子多糖降解為較小的碎片,而當分子減小到逡逑一定程度會降低其對DPPH自由基清除活性。因此H202-Vc的濃度選用4邋mM逡逑時進行以下兩項單因素實驗。逡逑2.3.1.2反應(yīng)溫度的影響逡逑52邋-逡逑::逡逑v溴危巍㈠義希椋簦媯媯殄義希潁澹澹義
本文編號:2728299
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